蓖麻油甾醇组成及其对大鼠蜕膜细胞的影响论文.docVIP

　　蓖麻油甾醇组成及其对大鼠蜕膜细胞的影响论文 张小雪 段双全 韩峰 高平 刘世贵 【摘要】 目的进一步探明蓖麻油中的抗生育物质成分。方法利用皂化和萃取,从蓖麻油中提取甾醇,用GC-MS分析蓖麻油甾醇成分；用MTT法检测蓖麻油甾醇对原代培养大鼠蜕膜细胞活力的影响。结果蓖麻油总甾醇的主要成分为γ-谷甾醇（43.02%）、豆甾醇（27.15%）、岩藻甾醇（11.43%）、麦角甾-5-稀-3 -醇（6.00%）和普罗布考（7.46%）。蓖麻油甾醇对细胞活力有抑制作用，其半抑制剂（IC50）剂量为：(88.45±3.196) μg/ml,r=+0.9549；抑制作用具有量-效关系。结论在蓖麻油甾醇的主要成分中，γ-谷甾醇（r-Sitosterol）可能是抑制原代培养大鼠蜕膜细胞活力的主要成分，而豆甾醇（stigmasterol）可能起协助的作用。 【关键词】 蓖麻油 甾醇 原代培养大鼠蜕膜细胞 气相色谱-质谱联用分析 四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法 Abstract：ObjectiveTo assay the constituents of phytosterol of castorbean seed oil and the inhibition on the viability of primary cultured rat decidual stormal cells (DSC). MethodsThe methods of GC-MS analysis and MTT method ain constituents of phytosterol of castorbean seed oil asterol (27.15%), Fucosterol (11.43%), Probucol (7.46%) and Ergost-5-en-3-ol (6.00%); the phytosterol possessed inhibitory activity on the viability of primary cultured rat DSC in a dose dependent manner. The IC50 l, r= +0.954 9. Conclusion The γ-Sitosterol may act as the main contributor in the inhibition on the viability of DSC，and the Stigmasterol might act as an assistant. Key ary cultured rat decidual stormal cells; GC-MS analysis; MTT method 蓖麻Ricinus munis L.为大戟科一年生或多年生草本植物，原产于非洲，我国各地均有栽培。蓖麻不仅是著名的油料作物，而且是重要的中药材。在我国.freelin离心30 min(0℃)；弃沉淀，留上清，挥发除去乙醇得乙醇提取物。此提取物用乙醚在50℃条件下索式提取24 h，挥发除去乙醚后即得蓖麻油。 取60 g 蓖麻油，用600 ml KOH 乙醇溶液 (1 M) 皂化 1h (100℃)， 趁热加入600 ml ddH2O，冷却后用乙醚萃取4次，合并萃取液，用480 ml dd H2O 清洗，共清洗4次，直到萃取液为中性。挥发除去乙醚，用600 ml dd H2O 重悬未挥发部分，每次用1 200 ml乙醚重新萃取不皂化物，重复萃取4次以除去残余皂化物；挥发去除溶剂即得淡黄色半固体物质，即蓖麻油不皂化物（得率1.135%）。用丙酮萃取除去丙酮不溶物，挥去丙酮，用95%乙醇室温下清洗除去黄色油状物，得白色晶体，即蓖麻油总甾醇（得率0.470%）。 用于体外培养大鼠蜕膜细胞活力抑制实验的蓖麻油甾醇与吐温-80按1∶1在研钵内混匀，再滴加于生理盐水中，配制成10 mg/ml的处理母液；将母液磁力搅拌30 min，无菌过滤后4℃保存备用。同法配制吐温-80生理盐水溶液作为阴性对照，米非司酮为阳性对照。 1.2 仪器设备和试剂气相色谱- 质谱联用仪（QP 2010 型，日本，岛津）；手提式压力蒸气灭菌锅（申安医疗器械厂）；二氧化碳培养箱（311型, Thermo，USA），超净工作台（STT和DMSO（Sigma 公司），青霉素（华北制药有限公司），庆大霉素（西南药液股份有限公司），DMEM/F12(1∶1)培养基 (Gibco，Invitrogen 公司)，小牛血清（成都哈里）。 1.3 大鼠蜕膜细胞的培养取妊娠15 d SD大鼠乙醚麻醉，去毛后断颈处死。75%酒精将大鼠整体消毒后放入超净台内，分别用碘酒、75%酒精消毒腹部皮肤和肌肉，迅