血液替代品的制备及其抗失血性休克的初步研究论文.docVIP

　　血液替代品的制备及其抗失血性休克的初步研究论文 摘 要 目的：制备以聚合牛血红蛋白（polyHb）为基质的血液替代品并评价其对失血性休克的复苏效能。［方法］用乙醇酸聚合牛Hb，超滤去除大于1000KD的大分子和小于100KD的小分子，得血液替代品基质poLyHb，用生理溶液平衡后，检测其生物学活性；从股动脉放血诱导大鼠休克，维持平均动脉压35mmHg 30min后，按大鼠的失血量输人等量的复苏液。复苏液为全血、乳酸化林格氏溶液及三种用聚合牛血红蛋白（polyHb）制备的血液替代品（6％polyHb溶液、12％polyHb溶液和12％polyHb+GSH溶液）。观察休克大鼠的复苏效果。将数只大鼠于输液后5min活杀，检测缺血再灌的心肌中自由基强度。［结果］牛Hb被聚合并超滤后.freelerized bovine Hb，polyHb）的生物学活性和流体力学特征，建立了主要以血压为指标的失血性休克的大鼠模型，比较了全血、乳酸化林格氏（LR）溶液以及用聚合牛血红蛋白（polyHb）制备的血液替代品（6％polyHb溶液、12％polyHb溶液和12％polyHb+GSH溶液）的复苏效果。 材料和方法 材料： 试剂：乙醇醛（Sigma），NaBh4（Acros），Sephacryl S-300（Phamacia），凝胶过滤高分子量子量子量校准试剂盒（Phamacia），蛋白质低分子量极准（Sigma），戊巴比妥钠（北京芳草医药化工），谷胱甘肽（GSH）（Sigma），其余皆为分析纯。 仪器： 2XZ型旋片真空泵（浙江临海精工真空设备厂），235／200高压液相色谱仪（PERKIN ELMER）， SK-GEL G4，OOOSillipore），ABL520血气分析仪（Radiometer），KJB3粘度仪（北京科海公司道生理记录仪）（ NHON DOHDEN），ESP300电子自旋共振仪（BRUKER），输液泵（上海沪西分析仪器厂）等。 原料：无基质牛Hb，用板框过滤法制备。 生理透析液：110mM NaCl， 3.5mM KCl，1mM MgCl2，27mM NaHCO3，O.5mM Na2HPO4，0.5mM KH2PO4，2.1mM CaCl2， pH7.4。 动物：标准 NaCl，4mM KCl，1.5mM CaCl2，28mM乳酸纳）；3 12％ polyHb溶液：12％polyHb溶于生理透析液而成；4 6％polyHb溶液：6％polyHb溶于生理透析液而成；5 12％polyHb+GSH溶液：12% polyHb溶液中加入4mM GSH。 方法： 一、血液替代品的制备： 1 用乙醇醛聚合牛Hb。 2 牛Hb聚合程度的检测： （1）不连续密度梯度SDS。 （2）HPLC检测：取少量聚合产物，用洗脱液稀释成1mg／ml，于PERKIN EL MER 235／200 Hplc仪（色谱柱为TSK-GEL G4，OOOSpH7.4 磷酸盐冲液，含0.1M NaCl；流速：O.5ml／min；紫外检测波长；280nm；进样体积：10ml。 3 用5A血液透析器将聚合产物中大于1000kD的成分除去，用100KD膜堆去除聚合产物中小于100kD的成分，同时用生理透析液进行平衡。 4 氧亲和力和Hb合量分析：用ABL520血气分析仪检测。 5 透析结束后的polyHb溶液的粘度测定：取透析后的12％polyHb溶液，用KJB3粘度仪检测其在不同切变率时的粘度值。 二、抗失血性休克试验： 1 大鼠用戊巴比妥钠（35mg／Kg体重）麻醉（肌注）并肝素化（1,000u／Kg）（肌注）。 2 将注满100u肝素／ml生理盐水的导管插人一侧颈外静脉以备输液。与多道生理记录仪的传感器相连的导管插入一侧劲动脉以记录血压和心率。另一导管插人一侧股动脉放血诱导休克。将电级插人四肢皮下记录心电图。 3 30min后大鼠苏醒，测其血压、心率及心电图。以5.6ml／Kg体重计算大鼠血量。从股动脉以O.5ml/min的速度放血以诱导休克，维持平均动脉压35mmHg30min。 4 大鼠被随机分为六组，每组6只： （1）组：不复苏组，观察休克的死亡时间及死亡率。 （2）组：全血组，将从股动脉放出的大鼠血液以1ml／min的速度从静脉回输。 （3）组：LR溶液，将LR溶液按大鼠失血量以1ml／min的速度从颈静脉回输。 （4）组：6％polyHb组，将6％polyHb溶液按大鼠失血量以1ml／min的速度从颈静脉回输。 （5）组：12％polyHb组，将12％polyHb溶液按大鼠失血量以1ml／min的速度八颈静脉回输。 （6）组：12%PolyHb+GSH组，特12％polyHb+GSH溶液按大鼠失血量以1ml／min的速度从颈静脉回输。 5 分