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　　血竭提取物对人成纤维细胞增殖的影响论文 李丹，郭树忠，王胜春，张琳西，胡永武 【关键词】 血竭；成纤维细胞；细胞增殖；伤口愈合 Effect of Dragons blood extracts on proliferation of human fibroblast cells 【Abstract】 AIM: To investigate the effect of Dragons blood on the proliferation of fibroblast cells in vitro and to explore the mechanism by otes an fibroblast cells edia containing gradient concentrations of 3 kinds of Dragons blood extracts (extracted by chloroform, acetidin and alcohol, respectively), ination assessed e intervals. The groost suitable concentration etry (FCM) ine the changes of cell cycle at this concentration. RESULTS: The 0.5-2.0 g/L dilution of Dragons blood extract by acetidin enhanced the proliferation of fibroblast in a dosedependent manner. The 2.0 g/L al concentration of Dragons blood extract, and it could increase the cell ratio in Sphase of cell cycle by 18.3% of that in control group (P 0.01). CONCLUSION: Dragons blood extract by acetidin could promote the proliferation of cultured human fibroblast cells in vitro, and it might be beneficial to granulation tissue formation during a，美国）；MTT(Amresco，美国)；96孔板（COSTAR，美国）；CO2孵箱(Heraeus，上海)；倒置显微镜(Olympas)；酶联免疫检测仪(Labsystems，芬兰)；血竭（皇冠牌，印度尼西亚）；流式细胞仪(ELITEEsp Coulter). 1.2方法 1.2.1成纤维细胞分离培养实验所用正常皮肤成纤维细胞来源于健康人体皮肤，采用组织贴块法进行原代培养，实验用5～10代细胞. 1.2.2血竭提取物制备将血竭生药分别经氯仿、乙酸乙酯、950 mL/L乙醇依次回流提取，得到3种提取液分别为氯仿提取物（A），乙酸乙酯提取物（B）、乙醇提取物(C)，经水浴挥干溶剂，再分别以二甲基亚砜（DMSO）助溶得到浓度为200 g/L的溶液，流通蒸汽灭菌30 min，常温保存待用. 使用时将A, B, C 3种提取液分别溶解于DMEM培养液，配制成浓度为0.125, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0,.freelL/L CO2培养箱中孵育24~48 h，待细胞完全贴壁后，吸弃培养液，A, B, C组分别加入不同浓度（0.125, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 8.0 g/L）血竭提取物条件培养液（150 μL/孔），D组加入含10 g/L DMSO的DMEM（150 μL/孔），E组加入DMEM培养液（150 μL/孔），每组均设6个平行孔及1个空白对照孔（用于检测时调零）. 于37℃, 50 mL/L CO2培养箱中培养24 h后，每孔加5 g/L MTT试剂10 μL，孵箱中培养4 h， 吸弃培养液，加入DMSO（150 μL/孔），震荡10 min. 酶联免疫检测仪在450 nm波长下读取光吸收值A. 1.2.4细胞生长曲线测定应用MTT比色分析法（方法同上），取0, 12, 24, 36, 48, 60, 72 h, 7个检测点，分为实验组（血竭提取物最适浓度）和对照组（DMEM），每组设6个附孔，用光吸收值A反映细胞数量，计算平均值并绘制生长曲线. 1.2.5细胞周期测定采用流式细胞仪，具体如下: 取8瓶对数生长期的成纤维细胞，每瓶计数约2.5×105. 弃去培养液，随机选取4瓶加入