血管内皮生长因子在脑缺血耐受大鼠中的表达论文.docVIP

　　血管内皮生长因子在脑缺血耐受大鼠中的表达论文 王国峰 沈娜娜 王静云 陈卫 赵仁亮 【摘要】 目的 检测局灶性脑缺血预处理诱导大鼠脑缺血耐受模型再灌注不同时间窗血管内皮生长因子(VEGF)的表达，探讨其在脑缺血耐受中的作用。方法 将55只CAO，25只）、缺血预处理＋再缺血组（IP+MCAO，25只），后两组再随机分成5个亚组。线栓法阻塞大脑中动脉(MCAO)建立局灶性缺血预处理模型（缺血预处理10 min），分别在缺血预处理后1、3、7、14、21 d进行再次缺血2 h再灌注22 h，然后取脑检查。应用苏木精伊红染色观察脑组织病理变化并测定脑梗死体积.freele points after reperfusion in a cerebral ischemiatolerant rat model induced by focal ischemia preconditioning, and study the significance of VEGF in cerebral ischemia tolerance. Methods Fiftyfive healthy CAO) group (SS+MCAO,n=25), and the ischemia preconditioning and subsequent MCAO group (IP+MCAO,n=25). The latter tia preconditioning, the rats ed MCAO ent ligation for 10 min. On the 1st, 3rd, 7th, 14th and 21st day after ischemia preconditioning,.freelatoxylin and eosin (HE) for histological study and determination of infarction volume. The models ined by immunohistochemical staining. Results pared e of cerebral infarction ia preconditioning induced cerebral ischemia tolerance. IPinduced upregulation of VEGF expression plays an important role in the induction of ischemia tolerance. ［KEY CAO，25只)，预缺血10 min后按不同的再灌注时间分为5个亚组，分别于再灌注1、3、7、14、21 d后给予2 h大脑中动脉阻塞（MCAO），再灌注22 h后处死；②假手术+再缺血组(SS+MCAO，25只)，分5个亚组，假手术代替预缺血(即仅暴露颈总动脉及分叉处，不插线阻断MCA)，在假手术后按前述不同时间点给予2 h的MCAO，再灌注22 h后处死；③假手术对照组（SS+SS，5只），两次均为假手术，即两次均仅给予暴露颈总动脉及分叉处，于第2次假手术24 h后处死。 1.2 预缺血及再缺血模型制备 采用由ZEALONGA等3改进的MCA二次线栓法。首先经左侧颈外颈内动脉插线（18.5±2.0）mm，阻断MCA，10 min后将线栓退出至颈外动脉（ECA）并埋于皮下，完成缺血预处理。在规定时间点用相同方法再次MCAO，缺血2 h后将线栓抽出至ECA，形成第二次再灌注，22 h后处死。动物清醒后观察其行为和神经症状，以动物清醒后出现右前肢不能伸展、爬行时向右侧转圈并存活至规定时间点作为造模成功的标准。各组动物术中均用白炽灯照射使其肛温维持在（37.0±0.5）℃左右，术后单笼饲养。 1.3 检测指标及方法 1.3.1 神经行为功能评分 按MENZIES等4等级评分法对其神经功能进行评分：无明显功能缺损为0分；提尾时对侧前肢屈曲为1分；拉尾时对侧前肢的抓力减弱为2分；可向各方向自发运动而仅当拉尾时向对侧转圈为3分；自发向对侧转圈为4分。 1.3.2 梗死体积检测 采用苏木精伊红（HE）染色。各组大鼠在规定时间内，用40 g/L多聚甲醛行心内灌注后断头取脑。将大脑沿冠状位横切为6片(厚2 mm)，去除额极，将切好的脑片固定于同一固定液中4 h。常规脱水，透明，浸蜡和石蜡包埋。每个蜡块切取1张切片(厚5 μm)，行HE染色观察病理变化；另5张切片使用Simple PCI图像分析软件（美国pix公司）计算梗死体积。梗死体积百分比=(非缺血侧体积－缺血侧正常脑组织体积)/非缺血侧体积×100％，非缺血侧体积或者缺血侧正常脑组织体积=(s1+s2+s3+s4+s5)