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Agilent LC 1100现场培训 大连理工大学生命科学与技术学院 内容目录 液相色谱仪器原理与构成 Agilent 1100LC液相色谱使用入门 常用维护保养知识 高效液相色谱仪器原理与构成 色谱分离示意图 色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram） 色谱分类 特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。 高压：150-350*105 Pa 高效：大于30000塔板/米 高灵敏：10-9g （紫外检测）、10-11g （荧光检测） 高效液相色谱法特点 HPLC流程及主要部件 1100 HPLC 叠放结构 输液系统－流动相的选择 2. 流动相类别 3. 流动相选择 4. 选择流动相时应注意的几个问题 溶剂前处理 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。 过滤膜种类 水系过滤膜 有机系过滤膜 溶剂前处理 脱气 目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 液相色谱流动相脱气使用较多的是离线超声波振荡脱气、在线惰性气体鼓泡吹扫脱气和在线真空脱气。 流动相的气泡进入液相泵会引起压力的上下波动,打开排空阀处理. 在线脱气机 Agilent 1100 在线脱气机 防止堵塞溶剂过滤器 清洁溶剂过滤器 关于溶剂 所用溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水； 所用溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜，过滤有机相应使用有机相滤膜，不能混用，也不要用错。每一张滤膜只能用一次，不能重复使用。 如果没有在线脱气机，所用溶剂应经过超声脱气。 水易滋生藻类，避免直接照射，过滤后的水最好使用不要超过两天。 如果条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂。 避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂。 在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡1小时，用水冲洗，但不要使用超声处理 流动相的洗脱方式 LC梯度洗脱与GC程序升温的比较 梯度滞后：系统体积的影响 Agilent 四元泵日常维护 Agilent 四元泵日常维护 Agilent 四元泵日常维护 Agilent 四元泵日常维护 Agilent 四元泵日常维护 当泵头安装有冲洗附件时，由于该附件中也有密封垫，这样就会增加活塞杆运动时的阻力。所以开泵前一定要用10％异丙醇，并将其流速调至约20滴/分钟使这溶液流过冲洗装置。 10％异丙醇有助于降低水的表面张力，并有抑菌作用。不要用其它溶剂代替。 当泵头安装有冲洗附件而不使用，会使密封垫及活塞杆的寿命减短。 进样系统 手动进样器 自动进样器 灵活的进样方式：全定量 　　　　　　　　部分定量　 携带进样　　　　　　　 Agilent 1100 自动进样器工作原理(2) Agilent 1100 自动进样器工作原理(4) 分离系统 化学键合相色谱柱: 将不同的官能团通过化学反应键和到硅胶表面的游离羟基上，而形成化学键和固定相，进而形成化学键和液相色谱柱。 反相: 70%; C18, 65%; C8, 15%; 苯基柱 5%, 正相: 20%; -NH2、 -CN 其它 (手性柱, 离子交换柱): 10% 反相色谱是目前应用得最为广泛的高效液相色谱方法。 C18 在反相色谱中应用得最为广泛。 色谱柱的选择 色谱柱的说明 Pgrandsil色谱柱（STC C18 色谱柱 4.6X250 mm，5um ） 重复性检测 柱温箱 控制温度，保证分析结果重现性 升高温度，降低了流动相的黏度，降低柱压，保证色谱系统的稳定性 检测系统 液相检测器 紫外可见检测器（UV/VIS） 二极管阵列检测器（PDA） 蒸发光散射检测器（ELSD） 荧光检测器（FLD） 示差检测器（RID） 电导检测器（CDD） 质谱检测器（MS） 检测器简介（一） Agilent 1100 紫外检测器工作原理 流通池的结构 光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器 荧光检测器（fluorescence detector） （FLD） 原理：某些溶质在紫外光激发后能发射可见光（荧光）的性质检测。 特点：选择性检测器、灵敏度高（10-12g）、对流量和温度敏感性低。 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应； 　　 检测器简介（四） ◆ 蒸发光散射检测器（E