第三章 固定化酶催化反应过程(wfw).ppt

固定化酶催化反应过程动力学 固定化酶在生化制药中的应用:固定化的青霉素酰化酶生产制造各种半合成的青霉素和头孢霉素 ;固定化谷氨酸脱羧酶可以生产γ-氨基丁酸,制成了CO2电极,可用于测定谷氨酸的含量。 固定化酶在医学上的应用:固定化纤溶酶治疗血栓,用固定化脲酶和微胶囊活性炭组成人工肾等 固定化葡萄糖氧化酶传感器是其中应用最为广泛的一种,将葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶和一种显色剂一起固定在试纸上,只要将该试纸浸入被检尿样中几秒钟就可以马上检测出尿样的葡萄糖是否超标,从而断定该妇女是有血糖、尿糖还是妊娠。 生化分析中最常用的H电极也绝大多数是固定化酶产品:固定化青霉素酶电极 重组海洛因酯酶传感器检测违禁药品 用聚丙烯酰胺凝胶包埋细菌电极可快速测定污水中的BOD。 ?m的定义 3.4 内外扩散同时存在时的限制效应 Bi Da、Bi和之间的关系 有效反应速率LB法 ??M值介于?0和?1之间，准确的结果取决于β值。 当β=∞→零级动力学； 当β=0 →一级动力学。 当β值处于上述两种情况之间,则需要用数值解来求其?M值。 如果已经有了?m一?m的曲线图，则可利用公式直接求出?m值，再利用有关图，就可求出?M值。 也可用近似公式求其?M值。 对膜状固定化酶，a=b=1； 对球形固定化酶，a=2.6，b=0.8。 梯勒模数 是一个重要无因次模型参数。其物理意义为： ?值愈大，表示内扩散传质速率相对于反应速率较慢，内扩散阻力对反应速率的限制程度就大。 ?值的大小来判断内扩散阻力对酶催化反应的影响程度。 (4)梯勒模数(Thiele modulus)的计算 对任何反应动力学和任何形状的固定化酶，普遍化的梯勒模数 Vp-固定化酶颗粒体积， Ap-固定化酶颗粒外表面积 rsi|Csi—Cs=Csi时的反应速率； Cseq——平衡时底物浓度，对不可逆反应Cseq=0。 不同动力学和不同形状的固定化酶催化反应的梯勒模数计算公式，具体见表 结论: ①颗粒大小(或厚度) →特性尺寸 。 该值愈大、 ?值也愈大，则?值下降。为了减少内扩散限制效应，应尽可能采用小颗粒固定化酶。 ②微孔孔径大小:若能增大De值，可使?减小，?值增大,内扩散限制效应减轻。 提高De值的重要手段是增大微孔孔径，以减少底物或产物在微孔内的扩散阻力。 从减小内扩散限制效应角度考虑，固定化酶宜采用小粒度大孔径。 ③当动力学参数k0、k1和rmax值增加时,?值增大，→ ?值下降。由于动力学参数值的增大，使内扩散限制效应的影响程度相对加大。 需要指出: 在?值公式中所有采用的动力学参数为本征动力学参数，这些参数的数值必须是在无内外扩散影响下所测得的值。 所用浓度表示为颗粒外表面浓度Csi，这是在有外扩散时的浓度，若不考虑外扩散影响，则可用Cs。(液相主体浓度)表示。包括β值、可用Cso／Km表示。 在确定有效因子所有方法中，都需要预先已知其反应的本征动力学参数，为此必须在已消除内外扩散影响的前提条件下进行动力学实验才能求得、给动力学实验带来了麻烦。引入表观梯勒模数方法 表观梯勒模数的定义式为： 在无外扩散影响下，Csi可用Cso表示。 Rs为内扩散影响下实测的宏观反应速率，不同动力学，?与?有各自关系式。 (5)表观梯勒模数法确定有效因子? 一级反应动力学： 零级反应动力学： M—M反应动力学： 在不同的β值下，以? ～ ?m对应作图，得到图所示的关系曲线。 ? ～ ?的关系曲线 β=0为一级反应 β=∞为零级反应 介于两者之间为M-M反应区域 在同一?值下，β值的变化对有效因子值影响不是很大。 　 固定化酶颗粒内部的微孔是弯弯曲曲的，微孔的大小也不均匀，微孔彼此之间可能封闭，也可能连通。因此与在主体溶液中进行的分子扩散相比，扩散阻力明显增大，其扩散系数要比分子扩散系数小。 对于常用固定化酶凝胶，De／D大约为0.5~0.8。但对于微胶囊固定化酶，由于颗粒内亦为液相，因此De≈D。 3.3.2 微孔内反应组分的浓度分布 在微孔内，由于内扩散阻力的存在，反应组分在微孔内的浓度分布不均匀。底物在固定化酶颗粒的外表面处浓度最高而在颗粒中心处浓度最低，形成浓度分布，而反应产物的浓度分布则与之相反。由于在微孔内扩散与反应同时进行，因而沿着微孔方向，底物的浓度及反应速率同时在下降。要描述浓度及反应速率的变化规律，必须建立包括扩散与反应在内的质量衡算方程式。 对球形固定化酶 (1)质量衡算方程：普遍而完整的质量衡算方程应表示为 [流入系统的质量]一[离开系统的质量]+[系统内产生的质量]一[系统内消耗的质量]=[系统内累积的质量] 对球形颗粒，常用一壳层进行质量衡算，如图所示。球形颗粒半径为R，在距球心为r处取一