第三章次级代谢产物的生物合成与调节.ppt

内容回顾 提高代谢产物的基本思想 代谢工程 质粒含有抗生素的结构基因 质粒含有合成抗生素的调节基因 质粒含有控制抗生素的分泌的相关基因 质粒含有对所产生的抗生素的耐性基因 氮代谢物的调节 氮源的种类和浓度的变化，对于次级代谢物的产生与积累也有很大影响，与碳降解物调节作用类似。一般能被迅速吸收利用氮源如氨，硝酸盐和一些氨基酸对抗生素的产生和积累有抑制作用。当培养基中这类氮源几乎被耗尽才开始产生与累积次级代谢物。 氯霉素，利福霉素等 前体或其结构类似物一般在生长期后加入才有效，在生长期内加入无多大效。 在生长期内添加的色氨酸很快被消耗掉，而在生长期末色氨酸在胞内的浓度比生长旺盛期高2至3倍。 * 四、反馈调节 青霉素生物合成受L-赖氨酸的反馈抑制。 赖氨酸一个中间体，α-氨基己二酸，参与青霉素生物合成。赖氨酸对其本身的生物合成的第一个酶(高柠檬酸合成酶)的反馈抑制作用限制了α-氨基已二酸的生成，从而间接地抑制青霉素的生物合成。因而如向青霉素发酵加入α-氨基己二酸，可减少赖氨酸的抑制作用。 * 芳香族氨基酸抑制杀假丝菌素的生物合成， 这些氨基酸(酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸)是对-氨基苯甲酸(杀假丝菌素、氯霉素的一个前体)的分枝途径的终点产物。因而对早期共同途径的一个酶的负向反馈调节，会阻遏杀假丝菌素、氯霉素的形成。 * 产物 调节作用 氯霉素 阻遏第一个酶芳基胺合成酶 卡哪霉素 阻遏乙酰基转移酶 霉酚酸 抑制合成途径最后一个转甲基酶 嘌呤霉素 抑制O-去甲基嘌呤霉素菜甲基转移酶 * 五、分解代谢物的调节 分解代谢物调节作用实际上是从抗生素发酵中观察到的。在1940年青霉素发展的早期阶段，就已发现可迅速利用的葡萄糖是青霉素生产的低劣基质。而乳糖被缓慢利用，对青霉素形成非常有利。在含有葡萄糖和乳糖的培养基里，葡萄糖在生长期内被迅速利用。当葡萄糖耗竭时，便开始利用乳糖。在乳糖缓慢利用期间，生长进入稳定期，并合成抗生素。 * 乳糖并不是青霉素生物合成的特异性前体，它的价值在于缓慢利用。今日的青霉素工业已采用缓慢补加葡萄糖的办法代替乳糖。限制葡萄糖在发酵中的浓度可使分解代谢物处在一低水平。 在葡萄糖与乳糖中青霉素代谢发酵曲线 * 其他分解代谢物的调节现象 有许多其他品种的发酵也受葡萄糖的阻遏，因而采用其他碳源。 葡萄糖抑制麦角生物碱、头孢菌素C、螺旋霉素、紫色杆菌素、嘌呤霉素、吲哚霉素、灵菌红素、盐屋霉素、丝裂霉素、杆菌肽、新生霉素、放线菌素和香豆霉素的形成。 在含有柠檬酸和葡萄糖的培养基里进行新生霉素发酵，柠檬酸首先被利用，只有在柠檬酸耗竭和出现二次生长时才开始利用葡萄糖和形成新生霉素。 如何解除这种分解代谢物调节？ * 六、能荷调节（磷酸盐的调节） 磷酸盐影响金霉素的合成。当培养液中的磷酸盐耗竭后才进入生产期。因金霉素的合成没有磷酸化这一步。 磷酸盐通常不是通过磷酸酯酶的负向反馈调节起作用的，而是通过高能荷抑制抗生素的合成。 ATP含量在生长期内增加，在金霉素形成期降低并保持在低的水平。高产突变株的ATP含量只有低产亲株的25%-50%。 * 外界物质的吸收或代谢产物的分泌都需经细胞膜的运输，如发生障碍，则胞内合成代谢物不能分泌出来，影响发酵产物收获，或胞外营养物不能进入胞内，也影响产物合成，产量下降。 在青霉素发酵中，产生菌细胞膜输入硫化物能力的大小影响青霉素发酵单位的高低。如果输入硫化物能力增加，硫源供应允足，合成青霉素的量就增多。 七、细胞膜透性的调节 * 八、提高次级代谢物的产量 1、操纵环境条件可控制许多次级代谢物的生物合成。 （1）加入诱导剂或前体 在生物碱发酵中加入诱导剂-色氨酸； （2）限制磷酸盐的量 （3）避免分解代谢物对生物合成酶的阻遏 青霉素发酵中避免使用可迅速利用的糖，如葡萄糖(若要使用，宜缓慢补入)。 * 2、改变微生物的遗传性质（突变），每一种调节机制都是由遗传决定的，通过诱变可提高菌种合成次级代谢物的能力。抗生素生产从它们的发现到今日提高了100到1000倍，突变的功劳最大。 （1）筛选营养缺陷型回复突变株 通过突变除去一种酶，再用第二次突变置换它(回复)。常获得耐反馈调节的突变株。有人通过突变使营养缺陷型失去生产金霉素前体一甲硫氨酸的能力，然后通过回复突变获得高产金霉素产生菌。 （2）筛选耐高浓度代谢产物的菌株 次级代谢物本身是生长抑制剂，则可将此抗生素用于筛选耐药性菌株，并从中获得高产菌株。 *