FlightlessⅠ与核质转运蛋白Importinβ及核孔蛋白.PDF

生 物 工 程 学 报 廖声友 等/Flightless Ⅰ与核质转运蛋白Importin β及核孔蛋白Nup88 的相互作用 1247 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn August 25, 2015, 31(8): 1247−1254 DOI: 10.13345/j.cjb.150047 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 Flightless Ⅰ与核质转运蛋白Importin β及核孔蛋白 Nup88 的相互作用 廖声友，王翠华，汤冬娥，魏金梅，贺玉娇，熊海庭，徐凤梅，高学娟，刘小会，刘朗夏 广东省高校功能蛋白质研究重点实验室 暨南大学生命与健康工程研究院，广东 广州 510632 廖声友, 王翠华, 汤冬娥, 等. Flightless Ⅰ与核质转运蛋白 Importin β 及核孔蛋白 Nup88 的相互作用. 生物工程学报, 2015, 31(8): 1247–1254. Liao SY, Wang CH, Tang DE, et al. Interaction of Flightless Ⅰwith Nup88 and Importin β. Chin J Biotech, 2015, 31(8): 1247–1254. 摘 要: Fightless I (FLII) 是一个在肿瘤中高表达的蛋白，前期研究提示FLII 可能参与核质转运过程，为鉴 定FLII 是否与核膜结合蛋白相互作用，构建GST-FLII 、GST-LRR 融合蛋白重组质粒并转化至大肠杆菌Rosetta 进行诱导表达，使用 GST 琼脂糖珠进行融合蛋白的纯化。通过 SDS对纯化蛋白进行验证之后，利用 GST-pull down 及免疫共沉淀技术证明了FLII 与Importin β、Nup88 蛋白的相互作用，并鉴定FLII 上的LRR 结构域为相互作用区域。研究结果提示FLII 可能参与了Importin β的部分生物学作用，为进一步分析FLII 与 Importin β、Nup88 的生物学功能奠定了基础。 关键词: 分子生物学，RNA 转运，GST-pull down ，免疫共沉淀，Flightless Ⅰ，Importin β，Nup88 Interaction of Flightless I with Nup88 and Importin β Shengyou Liao, Cuihua Wang, Dong’e Tang, Jinmei Wei, Yujiao He, Haiting Xiong, Fengmei Xu, Xuejuan Gao, Xiaohui Liu, and Langxia Liu Institute of Life and Health Engineering , Jinan University , Key Laboratory of Functional Protein Research of Guangdong Higher Education Institutes , Guangdong 510632, Guangzhou, China Abstract: High expression of Fightless I (FLII) is associated to multiple tumors. Based on our previous study that FLII might be involved in the nuclear export, we assessed the possible interaction of FLII with the nuclear envelop associating proteins