OK3细胞工程实验技术剖析.ppt

华侨大学生物工程系 刘建福 * * 实验室设置 基本技术 培养基及其配制 第三章 细胞工程实验技术 第一节 实 验 室 设 置 实验室组成 基本设备配置 培养容器与用具 细胞工程实验室的基本要求 实验准备— 包括培养基配制， 洗涤与灭菌等 无菌操作 控制培养 Culture room Preparation room Sterilizing room Sterile operation Cytology room Transition area 实验室布局示意图 ? 实验室 作用 基本要求 设备 化学实验室 化学药品和培养基的配制，各种实验药品的贮存 适宜基本实验有条不紊地进行 平面实验台,柜厨,精密天平,冰箱, 电炉,铝锅,灭菌锅等 无菌操作室 接种外植体,分离单细胞,培养物转移等 无菌；墙壁光滑平整，地面平坦无缝，适宜灭菌处理 超净工作台，紫外灯，并设有准备室（紫外灯） 培养室 培养材料的生活场所 能够控制温度、湿度和光照，无菌 培养箱，培养架，空调，暗培养设置，加湿器 细胞学实验室 进行实验材料的显微观察和照相等 干燥，整洁，明亮，光学仪器不受潮湿 各种显微镜、解剖镜，描绘和照相设备，切片染色设备 摄影室 对实验材料进行摄影记录或直接拍摄外植体 同上 带有照相设备的显微镜、电子显微镜，暗室设备（冲洗、印相、放大） 基 本 实 验 室 准备室 准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。 要求宽敞明亮，通风条件好。 接种室 接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥 清洁，能较长时间保持无菌。为了保持清洁，接种室 应防止空气对流。 培养室 培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要 要求是要能控制光照和温度， 其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。 辅 助 实 验 室 细胞学实验室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。 要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受 潮湿和灰尘污染。 摄影室及暗室 其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲 印。在有条件的情况下可建立此实验室。 生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应 建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有 效成分随时进行取样检查。 基本设备配置 基本设备 灭菌设备 光照培养室与设备 无菌操作设备 细胞学鉴定设备 天平 ，冰箱 ，酸度计 ，纯水器 活性成分过滤灭菌 接种工具随时消毒 培养基灭菌 玻璃器皿灭菌 防止空气对流 定期消毒 保持干燥,控制光照和温度 精确 培养 使用 特殊 设备 培养容器与用具 玻璃容器 塑料容器 金属用具 塑料用具 倒置显微镜 研究显微镜 激光共聚焦 显微操作仪 第二节 基本技术 洗涤技术 灭菌技术 合成洗涤剂 铬酸洗涤液 洗 涤 剂 ? 常用的铬酸洗涤液配方 成 分 强酸溶液 中酸溶液 弱酸溶液 重铬酸钾 (g) 63 120 100 硫 酸(ml) 1000 200 100 蒸 馏 水(ml) 200 200 1000 注意事项 在蒸馏水中缓慢加入浓硫酸，加热的同时分次加入磨碎的重铬酸钾至其完全溶解。 重铬酸钾加蒸馏水后加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸。 玻璃器皿洗涤 新的玻璃器皿，已使用过的试管、烧杯、 三角瓶、吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品 碱洗法（温热洗衣粉）和酸洗法（稀盐酸－－粘有蛋白质类物质或其它有机物） 塑料用品洗涤 一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较 强，因此冲洗时必须反复多次，最后用 蒸馏水冲洗。 金属用品洗涤 金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤， 需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火 焰干燥。 洗涤方法