磷脂在医药工业上的应用.doc

第七章 磷脂在医药工业中的应用 第二节 药用脂质体 三 磷脂作为药用脂质体的应用 （三）药用脂质体的制备 1天然药用脂质体 胰岛素脂质体[1] 脂质体组成：二棕榈酰磷脂酰胆碱，牛胰岛素，大豆卤醇，钙黄绿素 制备方法：二棕榈酰磷脂酰胆碱和大豆卤醇（摩尔比为7：2）用Hepes缓冲液（20mml/L Hepes和150mmol/L Nacl，PH7.5）以反相蒸发法分别制备包封胰岛素，钙黄绿素的二棕榈酰磷脂酰胆碱/大豆卤醇脂质体[2]，并挤压通过孔径为20nm的聚碳酸脂膜以调节微粒。未包封的物质通过SephadexG—100粒（1.5×26cm）以Hepes缓冲液（PH7.5）洗脱除去. 说明:1.胰岛素是一种有51个氨基酸的二链多肽,在维持体内血糖水平中起着重要作用.在胰岛素分子表面,同时有极性和非极性部分.胰岛素结构中有25%~42%的а-螺旋结构,因此胰岛素会和脂体膜相互作用. 2.经过测定,包封钙黄绿素和包封胰岛素质体的包封率(EE%)的实测值与例论值基本一致,说明钙黄素和胰岛素包封于脂质体内部,脂质体的粒径在170-190nm,粒径分布均匀. 根据通过Seephadex G-100柱前后的二棕榈酰胆碱（DPPC）与药物，以下式计算脂质体的包封率（EE%）： EE%实测=100（Da/Db）/（La/Lb） Da：通过Sephadex G-100柱分离后包封在脂质体内的药物量，Db为药物的投药量；La为通过Sephadex G-100柱分离后包封药物的DPPC量，Lb为DPPC的投入量。 EE%（理论）=（Vi/Vt）×100 Vi是脂质体内部的体积，Vt是脂质体混悬液的总体积。 Ⅱ 复方唐松草新碱多相脂质体[3] [4] 脂质体组成：唐松草新碱，大豆磷脂，胆固醇，油酸，聚乙烯吡咯烷酮（PVP），非离子表面活性剂。 制备方法：取唐松草新碱，大豆磷脂，胆固醇以及非离子表面活性剂在80oC左右熔融，然后加入相同温度的M/15磷酸盐缓冲液溶解的PVP中，高速搅拌即得。过滤，灌封于10ml安瓿中，用100oC流通蒸汽灭菌30分钟，放冷，剧烈振摇，使成均匀的多相脂质体混悬型静脉注射液即得。 说明：1。唐松草新碱盐酸盐注射液为水溶液，制成脂质体后，剂量从原来水针剂的100mg/Kg减小到10mg/Kg，而对S18O的抑癌率却有原来25%提高到42.7%,说明剂型可提高疗效，减小毒性。 2.处方中加入生物表面活性剂大豆磷脂，胆固醇，以及非离子表面活性剂等,减低双分子层的流动性,防止低分子药物渗出脂质体，保证药物的缓释作用，起到助悬作用，使剂型稳定。 3.本制备方法采取熔融法,能经受100oC30分钟灭菌。灭菌后脂质体聚集与介质分离,但经振摇即可恢复分散性,简化分子筛分离步骤和溶媒. 4.经过稳定性试验:粒度分布，加速试验(80 oC,8-10天)证明粒度随温度升高加大，仍属变化小,成品较稳定，25 oC贮存期为2.63年. 5.安全试验:过敏刺激，溶血,热原毒性试验等，证明符合要求，进入临床使用。对S18O和胃癌有抑制作用。 III 干扰素-α脂质体[5] 脂质体组成：干扰素-α2a,大豆磷脂，胆固醇，十八胺,三羟甲基胺基甲烷，山梨醇. 制备方法：采用粉末床研磨法制备前体脂质体。称取载体粉末，置于研钵中，脂质加入一定量的脂质乙醚溶液,研磨至乙醚挥干,真空干燥器中4 oC下放置过夜，通过100目的不锈钢筛网,即得类白色良好流动性的粉末状前体脂质体。加入适当的IFN-α2a(干扰素-α2a)的水溶液，以Ph7.4的Tris-HCL缓冲液定容,即得IFN-α2a混悬液. 说明: 干扰素-α具有广泛的抗病毒,抗增殖和调节免疫机能等生物学活性.近年来在药物的靶向治疗中发现,脂质体包封药物后,可使药物分布于肝,脾,淋巴结等网状内皮系统,从而提高肝内药物浓度. 2.本工艺制得的前体脂质体 水化性能良好,与IFN-α水溶液混合即得IFN-α脂质体,适合临床要求. 3. IFN-α前体脂质体的处方中,磷脂与胆固醇质量比为9:1,山梨醇为保护剂,保护剂与脂质的质量比为5:1,十八胺和脂质的质量比为1:9,制备的IFN-α脂质体的平均粒径为80.8±36nm. 4.包封率的测定:取未经分离和分离的IFN-α脂质体,假加入TrionX-100,使浓度为2.0mg/ml,在4 oC静止1h,用ELISA试剂盒测定IFN-α的浓度,其值为吸附在脂质体表面IFN-α的浓度. 包封率(%)=CL/CO×100% CO:总的IFN-α CL:脂质体中的IFN-α 经测定，本工艺制备的前体脂质体的包封率为59.0±3.3%. IV 油酸多相脂质体[6] 脂质体组成:油酸、大豆磷脂、胆固醇、PVP、非离子表面活性剂. 制备方法：取油酸、大豆磷