第四章__膜分离技术.pptVIP

二、亲和-膜过滤 1 亲和-膜过滤的特点 亲和-膜过滤是先将水溶性或非水容性的高分子亲和载体与产物进行特异反应，然后用膜进行过滤。 亲和-膜过滤同时体现了亲和层析中生物特异性吸附的优点以及膜分离可以大规模操作的优点。 (1)首先是制备亲和载体，其表面连接的特定基团必须对所提取的蛋白质有一定的特异吸附性； (2)然后将这种载体加入到发酵液中，载体与发酵液中的分离对象蛋白质选择性的结合并形成结合体； 2 亲和-膜过滤的过程 (3)再用膜对加入载体的发酵液进行过滤并保留载体与蛋白质形成的复合物，而那些杂蛋白则随着液体流过膜，从而实现分离对象与杂蛋白的分离与纯化。 (4)得到的复合体，只需改变缓冲液以释放结合在亲和载体上的蛋白，同时进行第二次膜过滤，这样就可以将分离对象与载体分离，载体在进行重新复活处理后还可循环使用。 3 亲和-膜过滤的应用 在实验室中，已经有很多用于酶分离了提取的成功例子，如将对氨基苯甲脒配基联于Dextran T2000载体上，用于从胰酶和胰凝乳蛋白酶中纯化胰酶；利用淀粉粒作为载体从酵母提取物中提取乙醇脱氢酶，等。 但在这种方法中，还存在许多问题比如非特异性吸附尚待解决。 膜分离的特点和存在的问题。 各种膜分离的推动力及原理。 不同膜材料优缺点。 水通量；截留率；截留分子量。 浓差极化与膜污染原因；膜污染的控制与处理。 影响膜分离速度的因素（凝胶极化模型）。 在浓缩与透析操作中，通过公式来计算理论收率以及达到目标所需要的时间。P88，习题5。 膜分离的应用。 亲和膜分离的原理。 * * * * * * * * * * * * * * 4．氧化剂：氯有较强的氧化能力。当NaOH或表面活性剂不起作用时，可以用氯，其用量为10-6mg/L活性氯，其最适pH为10～11。 5．酶：酶本身是蛋白质，能用其他清洗剂就不用酶。但如要去除多糖时，淀粉酶有一定作用的；对于蛋白质污染严重的膜，用含0.5%胃蛋白酶的0.01mol/L的氢氧化钠溶液清洗。 6．有机溶剂：由于有机溶剂对膜和装置有不良作用，因而很少采用。20-50％乙醇可用于膜装置的灭菌和去除油脂或硅氧烷消泡剂，但使用时系统必须符合防爆要求。 膜污染的清洗方法 第六节 膜分离技术的应用 一、菌体分离 是膜分离法的重要应用之一，特别是采用错流过滤的方式。 1 对大小不同细胞可较灵活的选择孔径不同的膜； 2 透水量不依赖细胞与悬浮介质间的密度差； 3 不需要任何助剂，有利于下一步纯化； 4 与离心相比可减少空气中病原体的污染； 5 滤液清净，回收率高； 6 处理量可通过增加膜面积来扩大，适于大规模连续操作。 谷氨酸提取工艺 除菌体 调酸 搅拌 静置沉降 母液 菌体与谷氨酸 谷氨酸结晶 离心 离心 湿谷氨酸晶体 母液 母液 发酵液 1、采用超滤法去除菌体，可以将发酵原液中固含量浓缩10倍，为菌体的再利用创造了条件； 2、超滤透过液中谷氨酸含量、pH等理化指标与发酵液相同，不含菌体，且蛋白含量很低，再利用等电点法提取谷氨酸时，收率可达到90.96%，比传统等电点法高7个百分点。 二、小分子生物产物的回收 氨基酸、抗生素、有机酸、动物疫苗等发酵产品的相对分子质量在2000以下，选用合适截断分子量的超滤膜，可以回收这些产物，然后利用反渗透进行浓缩和除去相对分子质量更小的杂质。第一个用膜法从发酵液中分离的发酵产物是甲氧头孢菌素C。 庆大霉素浓缩和纯化 原工艺： 发酵液?过滤?离子交换?稀溶液?减压浓缩?去热源（活性碳）?喷雾干燥（结晶） 该工艺缺点：抗生素为热敏性物质，浓缩时，部分破坏，色泽加深；浓缩耗能大。改用膜分离： 链霉素提取工艺 发酵液 板框过滤 D-152树脂粗提 原液 粗提液 P-302树脂精提 精提液 活性炭脱色 反渗透浓缩 滤后液 滤后液 浓缩液 活性炭脱色 成品液 喷雾干燥 浓度6万U/ml 浓度33万U/ml 浓度6000U/ml 浓度5.5万U/ml 在丙酮结晶母液中回收盐酸林可霉素： 原工艺：盐酸林可霉素→丙酮中结晶 → 丙酮母液(含盐酸林可霉素6％ ) → 低温自然沉降法回收，回收率1％-2％。 采用一般的纳滤膜来浓缩回收盐酸林可霉素，未获成功， 原因：母液中含有大量丙酮，一般纳滤膜不耐受有机溶剂。 Hydrochem公司发明了耐溶媒的纳滤膜，获得成功，总收率80％以上，结晶成品符合药典要求。 另外，抗生素等发酵产物中含有超剂量的热原。热原又称细菌内毒素，分子大小为2-10nm，分子量为20 000-1 000 000之间，是细菌新陈代谢和细菌死后分解的产物，药剂中的热原对人危害极大。但它耐热性很强，高压消毒对热原无大意义，所以必须除去。传统的除热原的方法是过滤加活性炭吸附，但并不可靠。用超滤膜可一次性除去水中