健康猪中猪链球菌检测技术及建议.doc

健康猪中猪链球菌检测技术及建议 　　【摘要】：猪链球菌病是由猪链球菌感染引起的一种常见传染病。猪链球菌的感染不仅对养猪业造成巨大的损失，同时也对公共卫生，尤其是相关的从业人员生命造成了危险，严重感染会引起患者的死亡。猪链球菌可以引起猪的多种疾病侵害，各个年龄段的猪。猪链球菌通常以败血症，脑膜炎，关节炎，淋巴结炎为主要特征。人类在接触病死猪，即可感染发病。本研究针对山西省部分猪场猪链球菌病的流行状况进行调查，在对送检的病死猪和表观健康猪，分别进行了猪链球菌的分离鉴定，耐药性分析，致病性分析和血清型鉴定。调查结果显示病死猪分离到的猪链球菌占11.3%，而表观健康猪则平均带菌率为5.14%，分离菌株的致病性不同，不同猪场菌株的耐药性也存在着差异。本研究旨在调查健康猪中猪链球菌带菌者状况，并揭示健康猪群携带猪链球菌的公共卫生学建议，同时为猪链球菌病的流行病学调查提供资料，有利于制定控制此病在猪与猪之间，猪与人之间流行的策略 【关键词】：猪链球菌，健康猪，毒力因子 猪链球菌属于链球菌属，它可以根据菌体荚膜抗原特性的不同，可以分成35个血清型。其中猪链球菌2型，在世界上流行最广，致病性最强，同时能引起人的感染，是一种重要的人畜共患病病原。国内外均有屠宰场从业人员感染猪链球菌的报道，也被认为是一种职业病。猪链球菌2型又称猪链球菌血清2型或荚膜2型猪链球菌。猪链球菌2型主要引起断奶仔猪，关节炎，脑膜炎，败血症及支气管肺炎。并且健康猪种带菌率达到了76%，给养猪业造成了严重的经济损失，也给公共卫生带来了威胁，从而受到了各有关方面的高度重视。此外，1型，7型，9型，14型也是引起猪感染的重要血清型 1 检测技术 1.1PCR鉴定 纯化的疑似猪链球菌菌株，利用检测谷氨酸脱氢酶基因进行猪链球菌菌种的鉴定，若为gdh阳性者再进行1，2，7和9型猪链球菌的PCR定型。以参考菌种的DNA模版为阳性对照，金黄色葡萄球菌的DNA模板为阴性对照，水为空白对照 1.2血清学鉴定 取经过PCR鉴定为猪链球菌的1，2，7，9型的分离株，猪链球菌1，2，7，9型参考菌株的24h Todd-Hweitt平板上的菌?w，按常规方法进行玻片凝集实验。凝集血清为猪链球菌1，2，7，9型标准抗血清。同时设PBS对照和菌体对照 1.3毒力因子检测 设计了扩增溶菌酶释放蛋白（MRP）、细胞外蛋白因子（EF）、溶血素（sly）、荚膜多糖（cps2A）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶编码基因（gapdh）、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白（FBPS）和orf2毒力相关基因的引物，以PCR方法对鉴定为猪链球菌1，2，7，9型分离株的6种毒力因子进行检测。所用于检测mrp、epf的引物，可扩增不同大小的mrp、epf片段，显示mrp、epf的变化 2 检测结果 利用gdh特异性引物扩增出688bp目的条带者，为猪链球菌。经过凝集试验发现，除FL42与猪链球菌1型和2型标准血清反应均呈阳性，且菌体自身不凝集，判为1/2型，其余菌株均与PCR结果相符，仅与对应血清型的标准抗血清发生凝集 毒力因子谱分析发现，除TN63外，分离株均缺少1至4个毒力因子，分离株FL42，WZ10和BB214检测到462bp的mrp片段，经过BLAST发现此片段与西班牙猪链球菌分离株376的mrp3224-3685段的基因相同 3讨论 猪链球菌自然存在于上呼吸道，尤其是扁桃体和鼻腔中。猪群里的感染，多是因为引入腭扁桃体带有病原体的表观健康猪，而存在于腭桃体上的猪链球菌的血清型非常多变。链球菌的抗原结构比较复杂，包括属特异，群特意和型特异三种抗原。猪链球菌根据菌体荚膜抗原特性的不同，可以分成35个血清型。从病猪和健康猪分离出的猪链球菌血清型不同。从病猪分离的菌种的血清型主要是2型。从健康猪的分离株却常见18，19，21型猪链球菌。猪链球菌2型有强致病力，弱致病力和无致病力菌株。从健康猪中分离到的猪链球菌2型中，溶菌酶释放蛋白（MRP），胞外因子（EF），荚膜多糖均为阴性。而从发病猪分离的猪链球菌2型大多数为MRP+EF+表型。携带猪链球菌的健康诸是屠宰场工人感染猪链球菌病的潜在来源。猪链球菌2型可以在4℃以下存活六周，在22-25摄氏度下可以存活十二天。屠宰场引入带菌动物，工人工作时可能通过伤口感染环境和猪体上的猪链球菌，引发猪链球菌病 猪链球菌的感染不仅对养猪业造成了巨大的损失，同时也对公共安全卫生尤其是相关的从业人员的生命造成了危险，严重感染会引起患者死亡。猪链球菌的血清型较多，那样还具有较强的地域性和时间性，不同地区分离株耐药谱不一致，即使同一地区的不同菌种也有明显的差异，所以不同猪场的猪链球菌分离株的耐药性也不同。同时猪场对抗生素的滥用，不仅导致治疗成