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PAS染色 高碘酸—希夫反应 （PAS反应） 原理 ? 高碘酸是一种氧化剂。 许多多糖残基含有的二醇基(CHOH—CHOH)可被高碘酸氧化为二醛(CHO—CHO)。 高碘酸的特点是不再进一步氧化巳生成的醛基。 二醛能与希夫试剂(Schiff Reagent)反应生成红色不溶性复合物。这个反应对于二醇基有特异性。 糖原系由葡萄糖残基为唯一成分组成的纯多糖，富含二醇基，故观察呈阳性反应。 PAS反应还可显示中性糖蛋白，因为其糖链中的许多己糖残基也含有二醇基。 虽然糖氨多糖中一些糖醛酸残基也有二醇基．在一般情况下它们不易被高碘酸化，除非提高反应温度并大大延长作用时间。 溶液配制 Carrnoy氏固定液： 100%酒精 60毫升 氯仿 30毫升 冰醋酸 10毫升 此液穿透力非常快，固定力强，对核固定优良，并可保存糖原，也用于糖类、DNA、RNA的固定。 溶液配制 Shiff试剂 0.5克碱性复红溶于100毫升沸水使溶（震荡5分钟） 冷至50摄氏度时，加1N盐酸10毫升 冷至25摄氏度时，加偏重亚硫酸钠0.5克 ---紧塞瓶口，室温避光放置12-24小时 ---加入0.5克活性炭，摇动1分钟（若为草黄色，此步可省略） ---滤纸过滤，入有色西口平，冰箱保存 1N盐酸 盐酸 8.5毫升 蒸馏水 91.5毫升 亚硫酸水 10%偏重亚硫酸钠 10毫升 1N盐酸 10毫升 蒸馏水 200毫升 一、切片、粘片 二、脱蜡、水化 二甲苯I 15分钟 二甲苯II 20分钟 100%酒精I 5分钟 100%酒精II 5分钟 95%酒精I 3分钟 95%酒精II 3分钟 80%酒精 2分钟 70%酒精 2分钟 三、PAS染色 蒸馏水洗，入0.5%过碘酸溶液 5-10分钟 蒸馏水洗，70%酒精洗，入schiff试剂15-30分钟。 亚硫酸水I 1分钟 亚硫酸水II 2分钟 亚硫酸水III 2分钟 流水洗 10分钟 四、苏木素染色（淡染） 2-3分钟 氨水返蓝 30秒 自来水冲洗 1分钟 五、脱水 70%酒精 1分钟 80%酒精 1分钟 95%酒精I 5分钟 95%酒精II 5分钟 100%酒精I 5分钟 100%酒精II 5分钟 六、透明 二甲苯I 10分钟 二甲苯II 10分钟 七、封片 显示肝糖原对动物取材有一定要求。 Schiff试剂要求：碱性品红质量可靠；偏重亚硫酸钠有刺鼻气味为好。 切片经过碘酸酒精溶液----糖原颗粒转粗； 切片经过碘酸水溶液------糖原颗粒较细。 实验结果分析 * * 原理 高碘酸—希夫反应 （PAS反应） 高碘酸—希夫反应 （PAS反应） 高碘酸—希夫反应 （PAS反应） 高碘酸—希夫反应 （PAS反应） 溶液配制 高碘酸—希夫反应 （PAS反应） 实验步骤 高碘酸—希夫反应 （PAS反应） 实验步骤 高碘酸—希夫反应 （PAS反应） 实验步骤 高碘酸—希夫反应 （PAS反应） 实验步骤 高碘酸—希夫反应 （PAS反应） 注意事项 高碘酸—希夫反应 （PAS反应） 实验对照设置