量热分析法.ppt

3.5.2压力扰动量热法(PPC) 近几年来新发展起来的技术，该方法可以用来研究溶液中大分子的水合作用变化时的容量性质的变化 在样品和参比池溶液上方的施加压力与解除压力时，样品池的大分子相对参比池对压力的不同响应伴随有微小的热量变化（ΔQ），ΔQ通过精密度很高的量热单元测得。 目前这种方法主要是通过一种压力扰动附件和VP-DSC共同完成的 PPC的工作原理 PPC法主要是通过测量大分子溶液受压力突变引起的微小的热量变化来研究大分子链的水合作用变化。VP-DSC的几乎完全相同的样品池和参比池分别加入样品溶液和参比溶液。样品池与参比池内溶液的唯一差别是样品池内含有研究的大分子，除此之外，其他的溶液环境相同。这两个池子上方公用一个压力室，即样品溶液和参比溶液处于相同的压力环境 实验开始时，某一温度下，设定压力P1施加于溶液上方，仪器基线达到平衡后，压力室的压力瞬间由P1降至P2（即压力释放过程），此时溶液吸热。由于样品室内含有少量的大分子，大分子受此影响也相应吸收热量，这种热量与溶液总体的热量相比要小得多，这种热量只有微量量热仪才能检测到（图2.10）当基线再次平衡后，压力又由P2瞬间增至P1（即加压过程），此过程的热量变化与压力释放过程完全相反。 当基线重新平衡后，该温度下的PPC实验完成。可以设定多个温度，通过比较多个温度下的热量受压力影响规律来研究大分子的容量性质变化。 PPC法的理论基础 对于理想气体，由热力学第二定律： 恒压下对压力微分式（3.81）可得： 根据Maxwell关系式： 式（3.82）可变形为： 式(3.84)中V为体积，α为热膨胀系数 (3.81) (3.82) (3.83) (3.84) 恒定温度T下积分式(3.84)，较小的压力变化(ΔP)引起的可逆热量变化为 Qrev=-T·V·?·?P (3.85) 假定V和α不随较小的压力变化，式(3.85)可应用于液体 对于溶液体系来说，如果溶液中含有gs g溶质和g0 g溶剂，溶液总体积可表示为： (3.86) 上式中，V0纯溶剂的比体积，VS是溶液中溶剂的偏比体积 VS不仅仅包括溶质分子的自身的体积，还包括由溶质与溶剂作用引起的溶质分子的体积变化 恒压下对压力微分式(3.86)可得 (3.87) 式(3.87)代入式(3.84)，可得 (3.88) 用α可以表示为 (3.89) 由式(3.89)，由压力扰动引起的热量变化可以视为压力分别对溶剂和溶质扰动引起的热量变化之和 较小压力范围内积分式(3.89) (3.90) 在实验中，样品池溶液和参比池溶液上方的压力变化相同，仪器测得的热量变化为样品池与参比池的热量变化的差值。假定两池体积相等，这个热量变化是由样品池内溶质分子所占体积gs·VS引起的，即： (3.91) 式(3.82)可变形为： (3.92) 对于水溶液，任一温度下水的α0可以通过手册查到，溶质的偏比体积可以通过密度仪测得，可由式(3.92)计算得到任一实验温度下的溶质分子的体积膨胀系数。 PPC法的应用举例 PPC法可以精确测量蛋白质（浓度最低可达0.25%）的热膨胀系数 5-90℃的糜蛋白酶原（chymotrypsinogen，Chtg）和核糖核酸酶的热膨胀系数(α)。Chtg在48℃的正方向的峰表明其解折叠时体积增加，峰面积积分即为体积增加值ΔVunf=0.18%或者34mL/mol。而RNASe的ΔVunf为-0.31%或-30mL/mol，变性温度为60℃。 这两种蛋白质变性后的α均高于变性前，在Tm位置Δαunf均变大了约1.3×10-4 由PPC法得到的ΔVunf以及Δαunf数值与文献中用其他方法得到的数值一致 图中两种蛋白质初始态的α随温度升高均下降，RNASe下降得尤为明显。这种现象在HEW溶菌酶和T4溶菌酶的研究中也被发现。这是由于暴露在蛋白质与溶剂界面的基团的溶解作用引起的 3.5.3等温滴定量热法(ITC) 滴定反应物到含有反应所必须的另一反应物的样品溶液中 每次滴定后，反应热放出或吸收，这些都可以被ITC所检测到 检测到的热效应为热力学分析提供了结合反应相关的能量过程的定量特征 可以直接测量与常温下发生的反应过程相关的热力学参数 工作原理 等温滴定微量热技术 ?T Reference Cell Sample Cell Syringe Constant power supplied to reference cell heater Adiabatic shield Power supplied to sample cell feedback heater proportional to ?T Output 3.5.4 多池差示扫描量热法（Multi-Cell Differential Sc