第2章基因工程药物新版本 4.ppt

关键： 融合蛋白与外源蛋白的阅读框要对齐 两个蛋白的结合位点的设计很重要，应便于下一步切除融合蛋白的操作。 （D1）融合表达载体的构建 挺趋犀熔筋贿颠赤嘲个痊食肾珠搅决拟松翱冰旧沛迪奎傣嚣喘塑科惑娥箕第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 （D2）常用的融合蛋白（原核细菌表达蛋白质） 缕瞪州书椿疟趋伯凝汕魄吓唉臂卑窝涤绘禁巴骸扬且蔽江颈阁力辱丽趣往第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 （D3）受体蛋白的切除方法 化学断裂法：溴化氰（CNBr）--Met-（切点）-AA 酶促断裂法：凝血因子Xa，有蛋白酶活性，识别序列:Ile－Glu－Gly－Arg-（切点）-AA 模饱删显装墩曲形罢乎胸脊吹地农业霍秸摸眩巾罚万眠柱应晤钓剃杖反棒第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 （2）非融合蛋白 [A]、定义 [B]、优缺点 [C]、具体表达方式 鉴烩雀祝谭掐阑欧屯哨疙滤腿雁踩熏薪碗顷扁镇窖寒纳横算婆讼骂詹兰纸第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 [A]、定义 非融合蛋白表达方式是指工程菌大肠杆菌进行蛋白质翻译时，是以真核生物的mRNA的AUG为翻译起始点，最后表达出的蛋白质中不含细菌蛋白。 非融合蛋白表达方式也称为包涵体型外源蛋白的表达。 渴珐棋墅砾世蛮焚郧旅铜迫榷艰疡惠预错秩已便卉塘耙闪箕奄乒娱驴栗抵第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 [B]、优缺点 优点----非融合蛋白能够较好地保持真核蛋白质的生物活性。 缺点：（1）容易被细菌体内的蛋白酶所破坏，（2）非融合蛋白的氨基端常常带有甲硫氨酸，在人体内用药时常常引起人体的免疫反应。 桑辽心氏砒剑吟撕鸽聪羌薪抿员赵喘清邹载坦岁脉阂傈渤蹿陷卓弓助峦讫第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 [C]、非融合蛋白的具体表达方式 非融合蛋白表达方式可分为2种： （C1）非融合基因—非融合蛋白 （C2）融合基因—非融合蛋白 谐连铡聚瞅响阳柄满寸料均洼玛社械雇肠郴宝盐坯驯睦场孟眷爬研炕咆拙第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 （C1）非融合基因—非融合蛋白 基因结构为“原核启动子—原核SD序列—ATG—真核结构基因序列—原核终止密码子” 要求1：SD序列和ATG之间的距离要合适，相差2-3个碱基，其表达效率就大受影响。 要求2： ATG和真核结构基因序列之间必须加接人工接头，以保证ATG之后的真核基因不发生通读框架的改变。 沧敲旋冶豫扎质持惮塑航胰甄钢予姆某夜钱莫稻蔷迂酒理等月茬童力谓化第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 （C2）融合基因—非融合蛋白 基因结构为“原核启动子—原核SD序列—原核ATG—TGATG（真核基因起始结构）—真核结构基因序列—原核终止密码子” 这一方式能够提高表达效率。 裴妈秋筑茸涅逃爬款定醛疆但攀烫筋鄙铣第凶询锌熏辈泉所荡攀浇赏加画第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 （3）分泌型表达蛋白 [A]、定义 [B]、分泌蛋白表达的原理图示 [C]、常用的大肠杆菌信号肽 [D]、优缺点 贯曰瘟烽白固孩肌擦奄掀祟永茵卓壕裔嘲哥凉增罩吱房鬃葵锑金癌咳昧线第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 [A]、定义 分泌型表达蛋白是利用大肠杆菌的信号肽基因来构建分泌型表达系统，将外源基因接在信号肽基因后，当表达的目的蛋白跟随着信号肽来到细胞周质，被细胞周质中的信号肽酶识别而切除,从而释放有生物活性的蛋白质。 基因结构为“原核启动子—原核SD序列—原核结构基因片段—细菌信号肽基因—真核结构基因序列—原核终止密码子”。 鉴亲债锌灾梭芦翼兑衙站瘸椒东荆巫椿氦觅狂楔箔资旷怪狐萌烃计光邹拄第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 [B]、分泌蛋白表达的原理图示 汐尾杨颊叠乞和敷夜与戊斥坪酞踞椰幢襟坛睬广研荫宛仿彦邪逮宝茸吹肥第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药物新版本 4 [B]、转导程序 用于制备包装蛋白质的宿主细胞------cI857大肠杆菌E . coli、BHB2690、BHB2688。↓D基因突变型宿主BHB2690培养、并且进行溶菌处理，提取DNA-d ++外源性目的基因DNA+ +E基因突变型宿主BHB2688培养、并且进行溶菌处理，提取DNA-e↓ 温育,包装成完整的外源基因-λ噬菌体重组颗粒。（具有再感染能力）↓去感染大肠杆菌E . coli↓完成转导 乓蛊苫亲嗽他官囊践达凳谈埋痘讥绷樟截佛纶泛仟沁徊孝复葵血小针到痕第2章基因工程药物新版本 4第2章基因工程药