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白癜风白斑区黑素细胞的体外培养及鉴定.pdf 19页

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白癜风白斑区黑素细胞的体外培养及鉴定
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贵阳医学院2014 届硕士研究生论文 白癜风白斑区黑素细胞的培养及鉴定 专业:皮肤病与性病学,研究生:刘 倩,导 师:陆洪光 摘 要 目的1、适用房胶带黏贴法获取皮肤表层的角质形成细胞,观察白癜风患者白斑 区的黑素颗粒 (Melanin granules )的数量及分布情况。2 、白癜风患者白斑区表 皮黑素细胞(Melanocytes ,MCs)的体外培养及鉴定,及其与正常人MCs 的比较。 方法 1、将使用负压吸疱法表皮移植治疗所获得的癜风患者白斑区疱壁剪下的表 皮用0.25 ﹪胰酶-0.02EDTA 放入37℃温箱消化30 分钟后进行MCs 培养及鉴定。 2 、使用胶布黏贴法获取患者白斑区及病损周围正常皮肤的角质形成戏班,通过 Masson-Fontana 银安染色法观察黑素颗粒的数量及分布情况。3、采用两步酶消 化法处理健康小儿包皮,获得表皮细胞悬液,用改良的M254 黑素细胞培养基培 养MCs。 结果:1、胶带黏贴法获取白斑区及其周边正常皮肤角质形成细胞,发现白斑区 边缘及中央均有黑素颗粒的存在。2、将负压吸疱获取的白斑区表皮进行MCs 体 外培养,发现有白斑区仍有MCs 的存在,其形态与正常儿童包皮的MCs 有区别。 结论:1、黑素细胞体外培养和胶布黏贴法均证明,白癜风患者白斑区仍有黑素 细胞的存在。2、胶布黏贴法能够简单可行的获取白癜风患者白斑区角质形成细 胞(Keratinocytes,KCs)的二维结构,有助于观察白斑区角质形成细胞黑素颗 粒的情况,客观的反应了白癜风皮损区MCs 的存在。 关键词:白癜风 表皮移植 胶带黏贴法 黑素细胞 - 1 - 贵阳医学院2014 届硕士研究生论文 前 言 白癜风(Vitiligo)是一种原发性的、局限性或泛发性的以表皮黑素细胞脱 失为主要表现的色素障碍性皮肤病,患病率在0.5﹪-2﹪,无人种、年龄和性别 的差异,研究证明,白癜风的发病与压力、感染、自身免疫、毒性化合物积累、 [1-3] 遗传、细胞环境改变等因素有关 。白癜风患者皮损区黑素细胞的缺失或是功 能障碍导致白斑出现为该病的直接原因。其表现为皮肤暴露部位、易摩擦部位或 其他部位出现大小不等的白色色素脱失斑, 白斑部的毛发可不改变也可完全变 白。白癜风一般对患者的身体健康和生理活动没有影响,但由于皮肤是构成人体 美的最要因素,会影响到患者的外观容貌, 对大部分患者的生活、学习、工作及 交际等各方面带来许负面因素, 从而影响了病人的生活质量,再者该病治疗起来 较困难且一般难以彻底治愈,所以该病为患者带来了极大的痛苦,因此, 研究白 癜风的治疗具有十分深远的意义。 关于白癜风患者白斑区是否存在黑素细胞一直存有争议,早期的研究认为白 [4] [5] 斑处MC完全消失 ,Tobin等 人报道了取材自进展期皮肤体外培养的黑素细胞可 以看见空泡化和细胞形态的变化,Galadari等用电镜观察IO例白癜风患者,发现 [6] 早期(2-6月)进行性皮损MC异常,晚期(1-5年)皮损MC消失 ,Le Poole以16种单 [7] 克隆抗体研究表明白斑处黑素细胞并未完全消失 ,Husain等报道白斑处仍可检 [8] [9] 测到残留的酪氨酸酶活性,表明白斑处黑素细胞并未完全消失 ,谭城等人 通 过白癜风皮损黑素细胞 HMB-45、酪氨酸酶及其相关蛋白1的免疫组化研究,证明 白斑区仍有黑素细胞。若白斑处仍有黑素细胞存在,激活残存黑素细胞使其增生, 促进其合成黑素,对于白癜风的治疗将会取得更好的效果。本实验通过对白癜风 患者白斑区负压吸疱后所得的表皮进行体外培养及鉴定及白斑区黑素颗粒的观 察来验证白斑区是否存在黑素细胞。详细实验情况如下:

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