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白纹伊蚊雌蚊唾液腺蛋白质组学初步分析.pdf 49页

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白纹伊蚊雌蚊唾液腺蛋白质组学初步分析
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贵阳医学院 2012 届硕士研究生论文 白纹伊蚊雌蚊唾液腺蛋白质组学初步分析 专 业:细胞生物学 硕士研究生:孙 宇 导 师:杨明 教授 吴家红 教授 摘要 【目的】:已有的研究表明蚊虫唾液组分并非无害的液体,而是具潜在药理活性 的液体,对脊椎动物宿主具有抗凝血、抗炎和调节宿主免疫功能的作用,在促进 蚊虫吸血与传病上具有重要意义。本研究旨在通过构建白纹伊蚊雌蚊糖水组(SF) 与吸血组(BF)唾液腺2D 图谱,比较白纹伊蚊雌蚊吸血前后唾液腺蛋白表达差 异,筛选与白纹伊蚊雌蚊吸血、传病相关的靶标蛋白,为后续蛋白功能研究奠定 基础。 【方法】:分别采用Pierce 蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE 电泳分析白纹伊蚊雌蚊 各日龄 (羽化后0 日、3 日、5 日、7 日、10 日龄)及饱血蚊唾液腺蛋白质含量 和蛋白谱;采用双向电泳技术构建糖水组和饱血组蚊虫唾液腺差异蛋白图谱,并 采用MALDI-TOF/TOF 质谱分析技术对差异表达蛋白进行质谱分析。 【结果】:1. 各日龄蚊虫单对唾液腺蛋白质量分别约为:0 日龄0.677±0.30μg/ 对唾液腺,3 日龄1.454±0.46 μg/对唾液腺,饱血组0.945±0.46 μg/对唾液腺, 5 日龄1.95±0.38μg/对唾液腺,7 日龄1.733±0.46 μg/对唾液腺,10 龄1.205 ±0.43 μg/对唾液腺。 2. SDS检测到各日龄唾液腺总蛋白有 12 条主带,吸血前后蛋白 条带并没有明显的变化,只表现条带亮度上的差异。 3. 成功构建 SF 组和 BF 组唾液腺 2D 图谱,利用 ImageMaster 2D Platinum 6.0 软件分析得到SF 组547 个蛋白,BF 组517 个蛋白。其中有26 个蛋 白表达差异大于2.0,4 个蛋白在吸血组中表达上调,22 个蛋白表达下调。质谱 分析只检测出23 个蛋白(有5 个蛋白系同一蛋白)。其中8 个蛋白属于看家蛋白, 11 个属于分泌型蛋白。在11 个分泌型蛋白中,2 个上调的蛋白系腺苷脱氨酶 (ADA)和三磷酸腺苷酶 (apyrase);9 个下调的蛋白(6 个有功能线索,3 个没 有功能线索)。 - 1 - 贵阳医学院 2012 届硕士研究生论文 【结论】:成功构建SF 组和BF 组唾液腺2D 图谱;质谱鉴定出吸血诱导的功能蛋 白有11 个 关键词:白纹伊蚊;唾液腺;蛋白组学;双向电泳 一、前言 蚊虫是最重要的媒介昆虫,可传播登革热、乙型脑炎、基孔肯亚热等虫媒病 毒病。在自然界,虫媒病毒主要通过吸血节肢动物刺叮易感脊椎动物宿主而得以 保存与传播。虫媒病的传播主要包括病原体在媒介体内的发育或/和增殖,到媒 介唾液腺定殖及准备入侵宿主的全过程。期间,病原体与吸血节肢动物唾液腺组 分之间发生复杂的相互作用,它们彼此共同进化,从而确定病原增殖的数量,入 侵唾液腺的时机及在随后的血餐时间准确入侵的准备情况。已有的研究表明蚊虫 唾液组分并非无害的液体,而是具潜在药理活性的液体,对脊椎动物宿主具有抗 [2] 凝血、抗炎和调节宿主免疫功能的作用 。由此可见,吸血节肢动物唾液腺是媒 介的一个重要器官,研究唾液组分蛋白与吸血、传病的关系及其分子机制,将有 助于阐明唾液组分蛋白在媒介传播效能中的作用,在开发设计新的疫苗用于虫媒 病的防治中具有重要的理论意义与应用价值。 由于蚊虫是小型昆虫,其唾液腺体积就更小,因此长期以来对它的研究主要 局限于用经典的生物化学和分子生物学方法对单个基因或单个蛋白展开研究,进 展十分缓慢。近年来,随着基因组学和蛋白质组学技术的高速发展,利用高通量 的方法来发现和筛选吸血双翅目昆虫唾液腺特异表达蛋白已成为这一研究领域 的热点。在蚊虫,当前从唾液腺转录组水平

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