α-萘胺二乙酸钠荧光猝灭法测定微量铜的方法研究.docVIP

1-萘胺二乙酸钠荧光猝灭法测定痕量铜的方法研究 周崇松* 陈练林 范必威 （成都理工大学材料与生物工程学院应用化学 成都 610059） 摘要： 本文研究了Cu(Ⅱ)对荧光分子1-萘胺二乙酸钠（NADA）的荧光猝灭现象。探讨了NADA与铜离子络合的反应条件及测定方法。研究表明，在最适条件下，痕量Cu(Ⅱ)存在时，能与NADA生成配合物而发生荧光猝灭现象；荧光猝灭强度（△F）与Cu(Ⅱ)浓度在0.1～1.0μg/ml范围内呈现良好的线性关系。相对标准偏差为0.36%，检出限4.26μg/L，方法应用于大米中Cu(Ⅱ)的测定，精密度较好，结果令人满意。 关键词：1-萘胺二乙酸钠；荧光猝灭法； 铜 荧光分析法在食品、卫生、医药、生物、环境等领域中发挥着重要的作用,已经成为一种重要的分析手段。铜的光度法分析很多，如卟啉法[1]、喹林法[2]、硫脉法[3]、催化光度法[4]和荧光酮法[5]等，但荧光法测定铜有一定优势，特别是利用铜离子对荧光猝灭作用建立起来的荧光猝灭法（FQ）1-萘胺合成1-萘胺二乙酸钠（NADA）作为荧光试剂[6]，并利用铜与NADA能发生荧光猝灭，探讨了波长、pH、介质、反应时间、NADA使用量、试剂加入次序等条件对荧光猝灭强度的影响，以及铜的含量范围对测定结果准确度和精密度的影响；并应用于大米中Cu(Ⅱ)的测定，与原子吸收法（AAS）相比较，取得满意的结果，证实了该方法测定痕量铜的可行性。 仪器与试剂及其制备 1.1仪器与试剂 F93型荧光分度光度计(上海棱光技术有限公司) ，原子吸收分光光度计（GGX-6A）； 1-萘胺，氢氧化钠，盐酸，乙酸/乙酸钠，氨水/氯化氨，乙醇，氯乙酸；（均为分析纯）； 铜标（光谱纯）； 1.2 NADA的合成制备 参照文献[6] 合成NADA，称取1-萘胺置于烧杯中，加蒸馏水在60℃搅拌溶解，溶液中有暗红色液体。再加入1：1氯乙酸的氢氧化钠溶液，搅拌均匀。在不高于100℃条件下蒸馏至无油状液体。蒸馏冷却后底部可见暗红色块状物。馏出液有大量的白色絮状沉淀，用蒸馏水冲洗蒸馏瓶中的白色沉淀于馏出液中。馏出液为所需的荧光试剂NADA，定容静置备用，低温时有白色的针状沉淀产生，使用时需加热保持在50℃。 2 实验方法 于10ml容量瓶加入1ml铜标准或样品或空白，3ml无水乙醇， 2ml缓冲溶液， 2ml NADA溶液，摇匀定容,室温放置30分钟，在λ=435nm处测定荧光强度。 3结果与讨论 3.1 条件实验 3.1.1波长对荧光强度的影响 按实验方法，在λ=360～540nm范围测定ＮＡＤＡ荧光强度，同时测定加入0.2g／Ｌ的铜标液的Ｃｕ-NADA荧光强度，结果如图1。由图1可知，当波长为435nm时，两者的荧光强度有最大差值，即有最佳荧光猝灭效果，故选择实验波长为435nm。 3.1.2溶液酸度对荧光猝灭强度的影响 按实验方法，用缓冲溶液调节pH（乙酸/乙酸钠调节pH1.0-7.0,氨水/氯化氨调节pH8.0-12.0，pH13用氨水/氯化铵+氢氧化钠调节）pH6.0时荧光猝灭强度趋于稳定，再加上便于控制，因此选择最佳实验pH6.0。 3.1.3介质乙醇的用量对荧光猝灭强度的影响 按实验方法，在pH6.0条件下分别加入不同量的乙醇进行测定荧光猝灭强度, 结果见图3。图3显示：乙醇用量为3ml时，有最大的荧光猝灭效果，且之后随着乙醇用量的增加，荧光猝灭强度反而减弱，因此，选择乙醇用量为3ml，即用30%乙醇为介质。 3.1.4荧光试剂NADA的用量对荧光猝灭强度的影响 按实验方法，在30%乙醇介质中分别测定不同NADA用量对Cu-NADA荧光猝灭强度的影响。结果见图4。当NADA用量为2.0ml时，已经有较好的荧光猝灭效果，从试剂消耗方面考虑，选择最适NADA用量为2.0ml。 3.1.5反应时间对荧光猝灭强度的影响 按实验方法，加入2.0ml NADA，在不同反应时间测定Cu-NADA荧光猝灭强度。结果见图5。反应在30min左右时出现平台，为了利于控制反应时间，故选择30min为反应时间。 3.1.6 各试剂加入顺序对荧光猝灭强度影响 按实验方法，改变各试剂的加入次序，在反应30min后测定其荧光猝灭强度。结果表明试剂的加入次序对Cu-NADA荧光猝灭强度没有影响。 3.2 工作曲线的制作 按实验方法，分别加入1ml 含有1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0μg铜量，和0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0μg铜量，测定荧光猝灭强度，作