晚期糖基化终末产物单克隆抗体制备与鉴定.pdfVIP

魏 芹等 晚期糖基化终末产物单克隆抗体制各与鉴定 第7期 晚期糖基化终末产物单克隆抗体制备与鉴定 魏 芹 陈 龙 王碧蕾 刘乃丰② 张寄南① (东南大学附属中大医院心脏科，南京210009) 中国图书分类号 R587．2 Q51 文献标识码 A 文章编号 1000-484X(2007)07-0649-04 [摘 要] 目的：制备抗人晚期糖基化终末产物AGEs单克隆抗体(McAb)。方法：孵育D．葡萄糖和人血清白蛋白 (HSA)获得AGEHSA，取凝胶层析纯化后的第1峰AGE—HSA作为免疫原，免疫BALB／e小鼠，采用杂交瘤技术制备抗AGE． HSA的McAb，用间接ELISA和Western blot鉴定其亚类和特异性。结果：成功筛选出3株稳定分泌抗AGE．HSA的McAb杂交 瘤细胞株，其分泌抗体亚类为IgM，经Western blot鉴定该McAb特异性高，亲和力强。结论：获得抗人AGE．HSA的McAb细胞 株3株，为深入研究AGEs和应用提供了有力工具。 [关键词] 晚期糖基化终末产物；单克隆抗体；制备和鉴定 Preparation and identification of monoclonal antibody of advanced glycation end products WEI Qin，CHEN 几g，WANGBi—Lei，LIUNai一 几g，ZHANGJi—Nan．Department ofCardiology，ZhongdaHospi- tal，Southeast University Medical College，Nanjing 210009，China [Abstract] Objective：To prepare and identify the monoclonal antibodies against AGEs．Methods：BALB／cnice were immu— nized with purified AGE—HSA protein，McAb against AGE—HSA was produced by hybridoma technique．Indirect ELISA and Western blot were used to identify the immunoglobin subtype and specificity．Results：Three novel murine monoclonal antibodies only against AGE—HSA were harvested．Th e subclass of these monoclonal antibodies were determined as IgM．Conclusion：The McAb against AGE— HSA protein may be a useful tool for studying Oil the biological properties of AGEs and for its detection clinical laboratory． [Key words] Advanced glycation end products；Monoclonal antibody；Preparation and identification AGEs是在非酶促条件下，蛋白质、氨基酸、脂 1 材料与方法 类或核酸等的游离氨基与还原糖的醛基经过缩合、 重排、裂解、氧化修饰后产生一组稳定的终末产物， 1．1 材料 它在DM慢性并发症包括大血管病变、微血管病变 1．1．1 动物 BALB／c雌性小鼠，8～12周龄，购自 (糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、糖尿病心肌病 南京军区总医院动物中心。 等)、神经病变等的发生发展中起着重要作用，是人 1．1．2 SP2／O细胞 江苏省人民医院心研所细胞 们研究的热点问题之一。血清或组织AGEs浓度已 库提供。 作为监视糖尿病，尤其是伴有肾脏损害及血管并发 1．1．3 主要试剂 HAT(100×)和HT(50×)购自 症病人治疗效果的一项指标 j。作为一项新的临 Hyclone公司；福氏完全佐剂和不完全佐剂为Gibco 床