温州盘菜离体培养植株再生体系的建立.pdfVIP

浙江理工大学学报，第25卷，第1期，2008年1月 Journal of Zhejiang Sci—Teeh University Vo1．25，No．1，Jan．2008 文章编号：1673—3851(2008)01—0123—04 温州盘菜离体培养植株再生体系的建立 曹亿会，陶 超。郭江峰 (浙江理工大学生物工程研究所，杭州 310018) 摘 要：以温州盘菜子叶一子叶柄为外植体，研究不同激素配比、AgNO。浓度、琼脂浓度和苗龄对不定芽再生的 影响。结果表明：0．8～1．0 mg／I NAA效果较好，2，4一D浓度大于0．2 mg／I 就会抑制不定芽再生，AgNO 浓度以 6．0 mg／L最佳，苗龄以5 d为宜，提高琼脂浓度对盘菜不定芽再生有抑制作用。最佳激素配比6一BA 3．0 mg／L+ NAA 1．0 mg／L+AgNO3 6．0 mg／L，不定芽再生率可达68．3 。 关键词：温州盘菜；子叶一子叶柄；不定芽再生 中图分类号：Q943．1 文献标识码：A 0 引 言 温州盘菜(Brassica campestris L．ssp．Rapifera．Matzg)是温州地区地方特色蔬菜品种，肉质根扁圆 如圆盘，故得名盘菜。温州盘菜属十字花科芸苔属芜菁种，质地细腻，致密，含有较多的钙、铁等矿物质和维 生素A、B、C等营养成分口]。其品质明显优于大头菜、萝b等肉质根类蔬菜 ]。据报道温州盘菜叶汁对遗传 物质损伤具有一定修复作用『3]。但近年来由于受到植物病毒侵染，其产量和质量受到严重影响[ 。遗传转 化方法获得抗病品种是快捷有效的抗病育种途径，离体培养植株再生体系建立是遗传转化抗病育种的必要 条件之一，虽然目前芸薹属植物离体培养已经取得了一定的进展，但温州盘菜是AA基因型和直根膨大型植 物，再生体系建立有其独特的生理特点，目前还没有成功的报道。本文以温州盘菜为材料，研究不同类型的 植物生长调节剂KT、ABA、6-BA、NAA、2，4-D、AgNO。和其他因素对盘菜离体培养的影响，初步建立盘菜 离体再生体系，为温州盘菜通过离体培养、遗传转化途径进行种质改良奠定基础。 1 材料与方法 1．1 材料 供试温州盘菜品种为“白玉盘菜”，种子由温州三角种业有限公司提供。盘菜种子经过表面消毒后，播种 在1／2 MS灭菌冷凝的培养基中。培养5 d后，取无菌苗子叶一子叶柄为试用外植体。 1．2 方法 1．2．1 配制培养基 以MS和1／2 MS为基本培养基，蔗糖浓度为20 g／L，用8 g／L琼脂固化。分化培养基和生根培养基在 MS培养基内添加不同激素，培养基用1．0 mol／L NaOH调节pH值至5．7～5．8，121℃高压灭菌20 min， 冷却备用。AgNO。过滤除菌。 1．2．2 无菌苗的培养 选取颗粒饱满的种子经流水冲洗干净后，用75 乙醇表面消毒30 S，无菌水清洗3次，再用0．1 的 HgCL 消毒5 min，然后用无菌水多次清洗，以保证无HgC1 残留，再播种在1／2 MS培养基上。每个广口 收稿日期：2007—09—12 基金项目：浙江省科技厅重大项目(20O5C22SA330O02) 作者简介；曹亿会(1976一 )，女，河南信阳人，硕士研究生，主要从事生物化学和分子生物学的研究。 124 浙 江 理 工 大 学 学 报 2008年 第 25卷 瓶播种2O粒种子，在(25±2)℃、光照时间16 h／d、光照强度2000 lx的培养条件下培养。 1．2．3 不定芽的诱导 将外植体的子叶柄基部插入含有不同激素配比的分化培养基中2～3 mm。研究AgNO。、苗龄、不同激 素配比、琼脂等因素对不定芽再生影响。根据预实验，分化培养基选择MS+2．0 mg／L 6-BA+0．3 mg／L NAA+O．1 mg／L 2，4一D。外植体均用直径9 cm培养皿培养，每皿接种15个外植体。每种处理接种6O个 外植体，在(25±2)℃、光照时间16 h／d、光照强度2000 lx的培养条件下培养，培养30 d后，调查并统计不 同培养基上不定芽再生率。 2 结果与分析 碍 2．1 不同浓度AgNO。对盘菜不定芽再生的影