温度对反相高效液相色谱分离纯化灵芝酸过程的影响.pdfVIP

食品，II错坟 研究与摆讨 Science and Technology of Food Industry 1．3 高效液相色谱参数的优化 同时，洗脱温度对分离度也有很大的影响，随着温度 硅胶柱层析的收集成分经减压浓缩，甲醇溶解 的增加，分离度越来越高，但在400(2和5O℃条件下， 后，进行高效液相色谱分离。色谱条件：高压液相色 有相似的分离度。综合评价，4O℃被确定为最佳的 谱系统：Shimadzu HPLC，色谱柱：岛津 ODS—C 操作温度。 5Ixm，4．5×250mm。紫外 检 测器 的 检测 波 长 为 2．3 优化后的色谱图 245nm，流速为 1mL／min。对洗脱温度、乙酸添加量、 高效液相色谱各项条件经过优化后，各个色谱 梯度时间进行优化，以分离度和容量因子作为优化 峰基本达到了基线分离，如图2所示。 函数。 A灵芝酸T(17．6min) 分离度 Rs：1．18(t 一t。)／(W。+W ) 式(1) 式中：t。、t：为相邻色谱峰的保留时间；w 、w 为 相邻色谱峰基线的相应峰宽。 容量因子 K’：(t 一t。)／t。 式(2) 式中：t 为指定色谱峰的保留时间；t。为溶剂死 体积的保留时间。 1．4 灵芝酸单体在C侣表面的热动力学行为 根据 van’t Hoff方程： 2．5 5．0 7．5 10．0 12．5 15．0 17．5 20．0 22．5 25．0 27．5 log k ：一AH／(2．3RT)+AS／(2．3R)+logo 式(3) 保留时间(min1 式中：AH和 AS是系统的焓和熵，T是绝对温 图2 优化后的色谱图 度，R是气体常数，‘1)是系统的相率 (phase ratio)。 2．4 灵芝三萜类单体在C侣表面的热动力学行为 对于中性分子，log k 对 1／T作图通常是线形的，斜率 ]《E 本实验中，在 15-55℃的范围内，对灵芝酸 T和 为 一△H／(2．3R)，Y轴截距为 AS／(2．3R)+logo。 咖枷抛 渤枷枷姗 Me在 C。 分析柱表面的保留行为进行了研究。 在本实验中，测定在 10-60~(2范围内的目的化合物的 图 3是从实验数据中得到的 van’t Hoff曲线。 分离因子。通过 van’t Hoff方程，求出 AH和 AS。 在以甲醇和水作为流动相的情况下，能形成氢键环 2 结果与分析 境，使灵芝酸成为中性分子。因而，这两条线几乎是 2．1 乙酸添加量对分离效果的影响 线性。在 10-60~C的范围内，很多实验者都发现在水 乙酸对分离效果有一定的影响。首先，在实验 和有机相作为流动相的条件下，都有线性的 van’t 中观察到未添加乙酸的流动相不能有效的分离三萜 Hoff曲线