猪白介素18基因在BHK细胞中的表达.pdfVIP

2007年 1O月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 4 2卷 第5期23～27 J OURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 双 月 刊 猪白介素1 8基因在B H K细胞中的表达 王笑笑 。，宗瑞谦 ，吕转萍。，窦永喜 ，宋世斌h ，景志忠 (1．甘肃农业大学动物医学院，甘肃 兰州 730070；2．中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病 病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室，甘肃 兰州 730046； 3．巴音郭棱职业技术学院生物工程系，新疆 库尔勒 84i000) 摘要：将猪白介素 18(Porcine interleukinl8。PIL一18)基因亚克隆到真核表达载体 pEGFP—N1中．构建了重 组表达质粒 pEGFP—PIL一18，利用脂质体法转染 BHK细胞，采用荧光显微镜实时观察和RT—PCR检测技术确 定目的蛋白的表达情况．结果在转染重组质粒24 h、48 h后的BHK细胞中均观察到绿色荧光．转染的BHK细胞 经G418筛选 14 d后．用RT—PCR法检测目的基因，并扩增到长576 bpd的目的cDNA片段。表明在BHK细胞 中成功地表达了PIL一18与EGFP的融合蛋白，这为下一步建立稳定表达 PIL一18的细胞系奠定了基础． 关键词：猪白介素18；转染；BHK细胞；真核表达 中图分类号：S 852．42：Q 785 文献标识码：A 文章编号：1003-4315(2007)06—0023—05 Expression of porcine interleukin1 8 in the BHK cell WANG Xiao—xlao 一，ZONG Rui—qian ，LO Zhuan—ping。，DOU Yong—xi。，SONG Shi—bin ，JING Zhi—zhong。 (1．Veterinary College of Gansu Agricultural University，Lanzhou 730070，China；2．Key Laboratory of Veterinary Parasito— logy of Gansu Province．State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology，Lanzhou Veterinary Research Institute， CAAS，Lanzhou 730046，China；3．Ba Yin Guo Leng Vocational and Technical College．Kuerle 841000，China) Abstract：Porcine IL一 18 gene was subcloned into the eukaryotic expression vector pEGFP—N1 to construct the recombinant plasmid pEGFP—PIL一18，which was transfected into the BHK cell by using Li— pofectin．The expression of PIL一18 was determined by fluoroscopy and RT—PCR，24 hours and 48 hours after transfecting，the Green fluorescence can be observed under fluorescence microscope and a 576 bp cD— NA was detected by RT—PCR 14 days after screening with G418．The results indicated that fusion protein of PoIL一18 and EGFP was successfully expressed in BHK cel1．This method can be further used to estab— lish a