猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ-ELISA鉴别诊断试剂盒的研制与应用.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal ofAgricultural Biotechnology 2007，15 (6)：91 1-917 · 研究论文· 猪胸膜肺炎放线杆菌ApxlW—ELISA鉴别诊断试剂盒的研制与应用 贾 凡 ，胡军勇 ，王建银 ，石 碧 ，李树清 ，陈焕春 ，周 锐 (1．华中农业大学动物医学院，农业微生物学国家重点实验室，武汉430070； 2．上海出入境检验检疫局，上海200135) 摘要：胸膜肺炎放线杆菌(Acfinobacilluspleuropneumoniae,APP)是一种严重危害世界养猪业的重要病原菌，至少有 l5种 血清型，根据所有血清型菌株仅在感染猪体内产生外毒素Apx1V的特点，建立了一种能够区分感染猪与免疫猪的鉴别诊断方 法ApxIV．ELISA。研究在反应条件方面加以优化，将该诊断方法进一步研制成试剂盒，对其特异性、敏感性、重复性和稳定性进 行了测试，与间接血凝试验及IDEXX公司的CHEKIT．APP．APXIV试剂盒进行了对比研究，并用该试剂盒检测了来自中国、英 国、丹麦、美国、加拿大、澳大利亚等国的临床猪血清l 453份。结果表明，ApxIV．ELISA试剂盒具有很高的特异性和敏感性，与 CHEKIT．APP．APXIV试剂盒的检测符合率为91．37％；3批试剂盒的批内和批间重复性良好(变异系数均l5％)；试剂盒在2～ 8C保存9个月内稳定性良好。所检种猪血样中，来自中国猪场l、中国猪场2、美国、加拿大、丹麦、澳大利亚和英国的ApxiV抗 体阳性率分别为30．05％、70．69％、39．72％、0．64％、42．22％、1．85％和93．94％；所检我国2个规模化猪场的仔猪ApxlV抗体阳性 率分别为21．77％和27．15％，育肥猪的阳性率分别为5．51％和l1．07％。研究表明，ApxIV．ELISA试剂盒能够有效区分APP感染 猪与三价灭活疫苗或亚单位疫苗免疫猪。 关键词：胸膜肺炎放线杆菌；ApxIV．ELISA；鉴别诊断试剂盒 中图分类号：Sl88 文献标识码：A 文章编号：1006．1304(2007)06．091 1-07 Development and Application of Apx 1V—ELISA Differentiating Diagnostic Kit for Actinobacillus pleuropneumoniae JIA Fan ，HU Jun—yong ，WANG Jian—yin ，SHI Bi ，LI Shu—qing2， CHEN Huan—chun ．ZHOU Rui r J．StateKeyLaboratoryofAgriculturalMicrobiology,CollegeofVeterinaryMedicine,HuazhongAgricultural University, Wuhan 430070,China；2．Shanghai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Shanghai 200135,China) Ab瞳l蛾 Actinobacillus pleuropneumoniae(APP1 is the causative agent of porcine contagious pleuropneumonia which causes great economic losses in the pig industry worldwide．There are at least l 5 serotypes of APP SO that it is very difficult to diagnose and control this disease．An ApxIV—ELISA which could distinguish the vaccinated pigs from APP—infected on