用亲和层析法分离纯化降纤酶.pdfVIP

药物研究 用亲和层析法分离纯化降纤酶 2008年第17卷第2期 黄 寓，金星光，侯庆华 (辽宁省血栓病中西医结合医疗中心研究所，辽宁 沈阳 110101) 摘要：目的 用亲和层析法从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化降纤酶。方法 用离子交换色谱、单克隆抗体亲和色谱技术进行分离纯化。结果 得到 电泳纯的降纤酶，其分子量为36 000。结论 用单克隆抗体亲和色谱法纯化降纤酶是切实可行的。 关键词：蛇毒；降纤酶；亲和层析 中图分类号：TQ461；IL096．3 文献标识码：A 文章编号：1006—4931(2008)02—0026—02 Purification of Defibrase with Afinity Chromatography Huang Yu，Jin Xingguang,Hou Qinghua r Liaoning Thrombus Medical Treatment Center Integrated Traditional Chinese Medicine and Western Medicine，Shenyang，Liaoning。 China 1 1OlO1) Abstract：Objective To purify defibrase from snake venom of Agkistrodon acutlz~by affinity chromatography．Methods Ion exchange chin． matography and monoclonal antibody affinity chromatography were used．Results The purified defibrase showed one band in SDS—PAPGE with relative molecular weight 36KD．Conclusion The method of the monoclonal antibody affinity chromatography is a practicable production procedure． Key words：snake venom；deftbrase；affinity chromatography 降纤酶是预防和治疗血栓病的一种新制剂【lI。从目前的文献 2)亲和层析柱的制备：采用经溴化氰活化的CNBr activated 看，由尖吻蝮蛇毒分离纯化降纤酶存在步骤多、工艺流程长、收率 Sepharose 4B凝胶，将得到的尖吻蝮蛇毒抗体偶联到多糖基质上。从 低等问题 -61，故笔者利用亲和层析法中特异性、选择性强的单克 而获得了单克隆抗体亲和层析柱。 隆抗体亲和层析技术分离纯化蛇毒降纤酶。 3)亲和层析法分离纯化蛇毒降纤酶：将上述经离子交换层析下 1 材料和方法 来的、经过透析后的活性组分，上以0．05 mol／L PBS缓冲液(pH： 1．1 试剂与仪器 7．40)平衡过的亲和层析柱。上样后先用0．05 mol／L PBS缓冲液 尖吻蝮蛇Agkistrodon acutu~蛇毒冻干粉，湖南源陵产；DEAE— (pH=7．4)洗脱杂蛋白，直至基线平直。然后用0．1 mol／L的甘氨酸一 Sepharose Fast Flow离子交换色谱柱和CNBr—activated Sepharose 4B HC1缓冲液(pH=4．0)洗脱，收集活性峰，立即用1 mol／L的Tris溶 凝胶均为GE Healthcare公司产品；降纤酶标准品、纤维蛋白原均购 液中和，使pH值在6．0—8．0之间。 自中国药品生物制品检定所；Balb／c小鼠(6周龄)由中国医科大 2 结果 ‘ 学提供；AKTA explorer，瑞典pharma