用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶及其折叠中间体的分子构象变化.pdfVIP

西北大学学报(自然科学版) 2007年12月，第37卷第6期，Dec．，2007，Vo1．37，No．6 Journal of Northwest University(Natural Science Edition) 用参数z表征疏水色谱中脲变 ·糜蛋白酶及其 折叠中间体的分子构象变化 耿信笃 ，刘振岭 ，柯从玉 ，李建军 (1．西北大学现代分离科学研究J 合成与天然功能分子化学教育部重点实验室，陕西西安 710069；2．新乡医学院化学 教研室，河南新乡 453003) 摘要：目的 用参数z表征疏水色谱中脲变 一糜蛋白酶( —Chy)及其折叠中间体的分子构象变化。 方法 用疏水色谱法对不同脲变条件下的 ．Chy进行分离，对收集的不同馏分用基质辅助激光解 吸附离子化飞行时间质谱(HPHIC．MALDI-TOF MS)进行检测，并用紫外和荧光光谱对其分子构象 变化进行了验证。结果 确认了脲变 ．Chy中仅有一个稳定的折叠中间体存在，发现二者的z值 均随脲浓度的增加而减小。在脲浓度范围为0～3．0 mol·LI1时， —Chy折叠中间体的Z值远小于 天然 ．Chy的Z值。而脲浓度为4．0 mol·L 和5．0 mol·LI1时，折叠中间体的Z值稍大于天然 — Chy的z值。结论 ．Chy折叠中间体的分子构象随脲浓度改变基本呈连续性变化，而天然 —Chy 的分子构象随脲浓度呈不连续性变化。进一步发现 -Chy的z值与其复性回收率之间存在着相似 的变化规律。中间体的保留机理服从计量置换保留理论(SDT-R)，且得到的参数z可用来表征天 然 ．Chy和其折叠中间体的分子构象变化。 关 键 词：蛋白折叠；分子构象；疏水相互作用色谱；基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱 (MALDI．TOF—MS)；计量置换； 一糜蛋白酶( —Chy)；折叠中间体 中图分类号：0658 文献标识码：A 文章编号：1000-274X(2007)06-0879-07 计量置换保留理论(Stoichiometric Displacement 蛋白折叠中间体是变性蛋白再折叠过程中形成的自 Theory for Retention，SDT—R)已广泛地应用于科学中 由能态较天然蛋白低的中间态，难以复性，因此研究 的多个领域 ]。该理论中的线性参数z值已成功 其特征会有助于了解蛋白折叠机理。由于蛋白折叠 地用于表征生物大分子的构象变化 J。Kunitani等 中间体的浓度太低且稳定性太差，不仅难以捕获和 人 测定了30余种白细胞介素_2的z值并用它表 检测而且难以将其分离出来进行研究，给进一步深 征了它们分子构象间的差异。时亚丽等人 用z 入研究带来了许多困难。迄今为止，对蛋白折叠中 值对反相色谱(RPLC)中生物大分子构象的变化进 间体分子构象变化的表征还未见报道。本文首次采 行了表征，Shiaw．Lin Wu等人 用z值并表征了疏 用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)和基质辅助激 水色谱(HIC)流动相中存在Ca 和Mg 两种金属 光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI．TOF．MS)联 离子时乳酸脱氢酶分子构象的变化，Macedo等人 用技术从脲变 一糜蛋白酶( ．Chy)中检测并分离出 用z值研究发现不同构象的 ．酪蛋白与固定相的 — Chy的折叠中间体，通过测定其z值来研究 ．Chy 吸附能力不同，卫引茂等人 J刚用z值表征了HIC 及其折叠中间体分子构象的变化情况，并用 ．Chy 中脲变和胍变蛋白质分子构象的变化。李敏等n 的生物活性、紫外吸收光谱和荧光光谱对其分子构 象的变化进行了验证。 和王彦等 分别用z值定量表征了在离子交换色 谱(IEC)中脲变溶菌酶及溶菌酶分子构象的变化。 收稿日期：2007—10-29特约 基金项目：国家自然科学基金资助项目20175916) 作者简介：耿信笃