糖尿病新型分子靶点葡萄糖-6-磷酸酶活性的检测及应用.pdfVIP

第13卷4期 天 津 医科 大学 学 报 Vo1．13．No．4 2007年12月 JOURNAL OF TIANJINMEDICAL UNIVERSITY Dec．2007 489 糖尿病新型分子靶点葡萄糖 一6一磷酸酶 活性的检测及应用 孙 颖．刘德敏 (天津医科大学代谢病医院实验室，天津 300070) [摘要]目的：研究利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测定葡萄糖一6一磷酸酶(G一6一Pase)的活性，并推荐其作为一种常用的 实验室检测方法。方法：以胶原酶原位灌注消化的方法分离大鼠肝细胞，用含10％FBS的1640培养液进行原代培养。 待细胞贴壁后分别换用新鲜的含葡萄糖和不同浓度栎精的培养液培养16 h，随后利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测定酶 的活性。结果：各组G一6一Pase的活性不全相同，其差别具有统计学意义(F=114．423，P0．05)；高糖组与对照组相比 较，G一6一Pase的活性明显增加(P0．05)；不同浓度栎精组G一6一Pase的活性下降，均低于高糖组(P0．05)，但其组间差 异无统计学意义(／90．05)，没有呈现出剂量依赖l生变化。结论：利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测定葡萄糖一6一磷酸酶活 性，是目前值得推崇的一个检测速度较快、结果较稳定的方法。此外，栎精能够有效逆转高糖诱导的G一6一Pase活性增 加，利用它对于G一6一Pase活性的干预作用可能改善糖尿患者的高血糖状态。 [关键词]葡萄糖一6一磷酸酶；肝细胞；糖尿病；葡萄糖脱氢酶偶联反应；栎精 [中图分类号]R587．1 [文献标识码]A [文章编号]1006—8147(2007)04—0489—04 The detection method of glucose-—6-—phosphatase activity and its effect on prevention and treatment of diabetes SUN Ying，LIU De-min (Laboratory of Metabolic Diseases Hospital，Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China) ABSTRACT Objective：To study the detection method ofglucose-6-phosphatase(G--6-Pase)activity using the glucose dehydrogenase coupled reaction and recommend it as a commonly used laboratory test． Methods：The hepatocytes were isolated fro m adult Wistar rat by perfusion of the liver with collagenase． The isolated cells were cultured in 1 640 with 1 0％ FBS．After cell attachment．the hepatoc-~rtes were ineubated with 25mmo1／L glucose and different concentration of quercetin for 1 6 hours，then the enzymatic activity was detected by glucose dehydrogenase-coupled reaction．Results：The activity of glucose一6一 phosphatase in high glucose group was higher