03哺乳动物组织基因组DNA提取探究.pptVIP

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2017-07-10 发布于湖北
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03哺乳动物组织基因组DNA提取探究.ppt

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* * 氯仿：异戊醇：24：1(体积比) 即配即用每支试管加 500 μl 氯仿： 480 μl 异戊醇： 20 μl * * 核酸的酚抽提原理：交替使用酚、氯仿两种蛋白质变性剂，更有效去除蛋白质。氯仿还可加速有机相与水相的分层。异戊醇：抑制界面泡沫的形成。标准程序：酚——酚-氯仿——氯仿。 * * 酚抽提除去蛋白质的示意图 * * 四、实验步骤(Experimental Procedures) 等量分装在两支离心管内加入20ul的RNase 加入等体积①提取液 4℃ 10min 酶解样品待抽提的样品抽提静置离心配制 TE缓冲液加等体积②提取液500ul 10000r／min离心10min 4℃ 10min 移出水相至离心管抽提静置 10000r／min离心10min 加1/10 加2倍放入离心移出水相 NaAc 无水乙醇 -20℃ 1-2h 12000r／min离心15min 加入超低温冰箱融化、离心弃上清液洗涤 12000r／min离心15min 干燥 4℃ 75%冷乙醇离心弃上清液加TE 50μl 存放 DNA * * 核酸的沉淀原理：核酸与钠、钾、镁形成的盐在许多有机溶剂中不溶，也不会变性。醋酸钠为沉淀DNA、RNA的最常用盐类。有机溶剂：乙醇、异丙醇、聚乙二醇。温度：冰水 * * 四、实验步骤(Experimental Procedures) 等量分装在两支离心管内加入20ul的RNase 加入等体积①提取液 4℃ 10min 酶解样品待抽提的样品抽提静置离心配制 TE缓冲液加等体积②提取液500ul 10000r／min离心10min 4℃ 10min 移出水相至离心管抽提静置 10000r／min离心10min 加1/10 加2倍放入离心移出水相 NaAc 无水乙醇 -20℃ 1-2h 12000r／min离心15min 加入超低温冰箱融化、离心弃上清液洗涤 12000r／min离心15min 干燥 4℃ 75%冷乙醇离心弃上清液加TE 50μl 存放 DNA * * 四、实验步骤(Experimental Procedures) Agarose Gel Electrophoresis ： Preparation of the gel 制备0.3％琼脂糖凝胶 Loading DNA samples DNA samples 16μ