2016内蒙古职校乳品分析与检验教案：项目十七 大肠菌群的检验.docVIP

项目十七 大肠菌群的检验 学习任务： 1.学习大肠菌群的检验方法。? 2.学习配制乳糖胆盐培养基。 3.学习配制伊红美蓝琼脂培养基。 4.学习对大肠菌群的判断及记数。 任务要求： 1.?掌握大肠菌群的检验方法。 2.?掌握乳糖胆盐培养基的配制。 3.?掌握伊红美蓝琼脂培养基的配制。 4.?掌握大肠菌群的判断及记数。 所需掌握知识点： 大肠菌群：一群能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要条件来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中是否有污染肠道致病菌存在。大肠杆菌对健康有潜在的危险性，GB属于安全指标。食品中大肠菌群数系以100mL（g）检样内大肠菌群最可能数（MPN）表示。一、试剂与培养基(1)?成分 ????胰蛋白胨或胰酪胨??????????????????20.?0?g ????氯化钠??????????????????????5.?0?g ????乳糖????????????????????????5.?0?g ????磷酸氢二钾(K2?HPO4?)???????????????2.?75?g ????磷酸二氢钾((KH2PO4)???????????????2.?75?g ????月桂基磺酸钠??????????????????????0.?1?g ????蒸馏水??????????????????????1?000?mL pH6.?8±0.?2 (2)?制法 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。 2.?煌绿乳糖胆盐(brilliant?green?lactose?bile,BGLB)肉汤 (1)?成分 ????蛋白胨??????????????????10.?0g ????乳糖??????????????????????10.?0g ????牛胆粉(oxgall或oxbile)溶液????????200.?0mL ????0.1%煌绿水溶液??????????????????13.?3mL ????蒸馏水?????????????????????1?000mL pH7.?2±0.?1 (2)?制法 将蛋白胨、乳糖溶于约500mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200mL(将20.?0g脱水牛胆粉溶于200mL蒸馏水中，pH7.?0～7.?5)，用蒸馏水稀释到975mL，调节pH至7.?4，再加人0.1%煌绿水溶液13.?3mL，用蒸馏水补足到1?000mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。 3.?结晶紫中性红胆盐琼脂(violet?red?bile?agar,?VRBA) (1)?成分 ????蛋白胨?????????????????????????7.0g ????酵母膏?????????????????????????3.0g ????乳糖???????????????????????10.0g ????氯化钠?????????????????????????5.0g ????胆盐或3号胆盐?????????????????1.5g ????中性红?????????????????????????0.03g 结晶紫?????????????????????????0.002g? 琼脂???????????????????????????15～18g 蒸馏水?????????????????????????1?000mL pH7.?4±0.?1 (2)?制法 将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调节pH。煮沸2min，将培养基冷却至45～50℃倾注平板。使用前临时制备，不得超过3h。 4.?磷酸盐缓冲液 (1)?成分 ????磷酸二氢钾(KH2PO4)?????????????34.0g ????蒸馏水?????????????????????500mL pH7.?2 (2)?制法 ????贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.?2，用蒸馏水稀释至1?000mL后贮存于冰箱。 稀释液：取贮存液1.?25mL，用蒸馏水稀释至1?000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。 5.??无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1?000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌 15min。 6.??1mol/L氢氧化钠(NaOH?)：称取40g氢氧化钠溶于1?000mL蒸馏水中。 7.??1mol/L盐酸(HCl)：移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1?000mL?。 8?.??PetrifilmTM大肠菌群检验测试片和压板。 二、设备和材料 图4-3-1?大肠菌