实验步骤,超声波法提取玉米芯黄酮的工艺研究.docVIP

超声波法提取玉米芯黄酮的工艺研究 1．单因素实验 1）乙醇浓度对黄酮提取效果的影响 称取样品0.5000g(60目)，按料液比1:20(g/mL)分别加入20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液，用保鲜膜封口，于室温下浸泡2h，然后在温度30℃下超声处理20min，离心，将提取液用蒸馏水定容至50mL，测定总黄酮含量。 2）颗粒粒度对黄酮提取效果的影响 称取20、40、60、80、100、120目样品各0.5000g，按料液比1:20(g/mL)加入适宜浓度乙醇溶液，用保鲜膜封口，在室温下浸泡2h，然后在30℃下超声处理20min，离心，将提取液定容至50mL，测定总黄酮含量。 3）料液比对黄酮提取效果的影响 称取适宜粒度样品0.5000g，分别按料液比1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40 (g/mL)加入适宜浓度的乙醇溶液，用保鲜膜封口，先在室温下浸泡2h，然后在温度30℃下超声处理20min，离心，最后将提取液定容至50mL，测定总黄酮含量。 4）超声温度对黄酮提取效果的影响 称取适宜粒度样品0.5000g ，按适宜料液比 (g/mL)加入适宜浓度乙醇溶液，用保鲜膜封口，在室温下浸泡2h，然后分别在温度30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃处理20min，离心，将提取液定容至50mL，测定总黄酮含量。 5）超声时间对黄酮提取效果的影响 称取适宜粒度样品0.5000g，按适宜料液比加入适宜浓度乙醇溶液，用保鲜膜封口，于室温下浸泡2h，然后在适宜温度下分别超声处理10min、20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min，离心，将提取液定容至50mL，测定总黄酮含量。 6）超声次数对黄酮提取效果的影响 称取适宜粒度样品0.5000g，按适宜料液比加入适宜浓度乙醇溶液，用保鲜膜封口，采用室温下浸泡2h，适宜温度下超声处理适宜时间，分别超声处理1、2、3、4次，离心，合并提取液，并定容至50mL，测定总黄酮含量。. 2.玉米芯黄酮提取的响应面分析与优化 在单因素试验的基础上，选择（乙醇浓度、料液比、超声温度、提取超声时间或粒度，根据单因素结果选择），设置4因素3水平，利用中心组合设计.确定最佳提取工艺。 芦丁标准液的配制及标准曲线的绘制 准确称取105℃烘干至恒重的芦丁标准品0.0250g于100mL容量瓶中，用80%乙醇溶解，定容，冷藏放置于冰箱中。准确吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0、16.0mL于50mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠1.5mL，混匀，放置6min，加入10%硝酸铝1.5mL，混匀，放置6min，加4%氢氧化钠20mL，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置15min,在波长510nm下测定吸光度。以芦丁含量(g/mL)为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。 总黄酮含量的测定 取待测液10ml于50ml容量瓶中，加5%亚硝酸钠1.5mL，混匀，放置6min，加入10%硝酸铝1.5mL，混匀，放置6min，加4%氢氧化钠20mL，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置15min。在波长510nm下测定吸光度。 黄酮得率＝（黄酮类物质质量／干物质质量）×100%。 振荡法提取玉米芯黄酮的工艺研究 4.1玉米芯黄酮提取的单因素试验 4.1.1溶剂种类对玉米芯黄酮提取效果的影响 称取玉米芯粉末(60目)0.5000g，按料液比1:20(g/mL)分别加入水、90%的乙醇溶液，用保鲜膜封口，浸泡30分钟，置于50℃恒温振荡器中振荡浸提1h，离心，再按同样条件浸提1次，离心，合并提取液，用蒸馏水定容至50mL，测定总黄酮的提取率 4.1.2乙醇浓度对玉米芯黄酮提取效果的影响 称取玉米芯粉末(60目)0.5000g，按料液比1:20(g/mL)分别加入浓度为20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇溶液，用保鲜膜封口，浸泡30分钟，置于50℃恒温振荡器中振荡浸提1h，离心，再按同样条件浸提1次，离心，合并提取液，用蒸馏水定容至50mL，测定总黄酮的提取率。 4.1. 3样品粒度对黄酮提取效果的影响 称取粒度为20、40、60、80、100、120目粉末各0.5000g，按料液比1:20(g/mL)加入适宜浓度乙醇溶液，用保鲜膜封口，浸泡30分钟，置于50℃恒温振荡器中振荡浸提1h，离心，再按同样条件振荡浸提1次，离心，合并提取液，用蒸馏水定容至50mL，测定总黄酮的提取率。 4.1.4固液比对黄酮提取效果的影响 称取适宜粒度的玉米芯粉末0.5000g，按料液比1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40加入适宜浓度乙醇溶液，用保鲜膜封