多房棘球绦虫重组Bb—Em14—3—3疫苗的构建及其表达效率.pdfVIP

第2 9卷第2期 西 安 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) Vo1．29 No．2 2 0 0 8年4月 Journal of Xi’an Jiaotong University(Medical Sciences) Apr．2008 多房棘球绦虫重组Bb—Eml4—3—3 疫苗的构建及其表达效率 杨 梅，李文桂，朱佑明 (重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所，重庆 400016) 摘要：目的 构建多房棘球绦虫(Era)重组双歧杆菌(Bb)一Eml4—3—3疫苗，并研究Em14—3—3分子在春肠埃希菌BL21 (DE3)中的表达效率。方法 通过 PCR扩增Em14—3—3抗原编码基因；将该基因定向克隆于含有谷胱甘肽一 转移酶 (GST)基因的大肠埃希菌一双歧杆菌穿梭表达载体 pGEX—lkT，构建重组质粒pGEX—Em14—3—3；用电穿孔法将该质粒 导入Bb，构建多房棘球绦虫重组Bb～Em14—3—3疫苗 经PCR和酶切鉴定后以IPTG诱导表达Eml4—3—3／GST融合蛋 白；SDS及Western blot对表达产物进行鉴定。结果 PCR成功扩增出530 bp的Em14—3—3基因；双酶切证实 Em14—3—3基因插入pGEX—lkT中；PCR证实重组Bb-Eml4—3—3疫苗构建成功；SDS及Western blot分析显示 重组质粒转化宿主菌在IPTG诱导下高效表达了Eml4—3—3／GST融合蛋白，表达效率为23 。结论 成功构建了多 房棘球绦虫重组Bb—Em14—3 疫苗，重组质粒 pGEX—Em14—3—3在大肠杆菌中获得了高效表达，Western blot结果提 示表达出的Era14—3—3重组蛋白具有特异抗原性。 关键词：多房棘球绦虫；重组Bb—Em14—3—3疫苗；构建；表达 中图分类号：R383．3 文献标识码：A 文章编号：1671—8259(2008)02—0148—04 Construction and expression efficiency of recombinant Bb．．Em1 4．．3．．3 vaccine of Echinococcus multilocularis Yang Mei，Li Wengui，Zhu Youming (Institute of Infectious and Parasitic Diseases，the First Affiliated Hospital， Chongqing University of Medical Sciences，Chongqing 40001 6，China) ABSTRACT：0bjective To construct recombinant Bb—Eml4—3—3 vaccine of Echinococcus multilocularis and to investigate expression efficiency of Eml4—3—3 antigen encoding gene in Escherichia coli BL2 1(DE3)．Methods Eml4—3—3 antigen gene was amplified by PCR．Then the gene was cloned into Escherichia coli—Bifidobacteria shuttle plasmid pGEX一12 T containing gluathione—S-transferaze(GST)gene to construct pGEX—Eml4—3—3．The recombinant plasmid was electroporated into Bifidobacteria bifidum (Bb)