福氏志贺菌外输调节蛋白基因marA的原核表达载体构建及其鉴定.pdfVIP

中国动物检疫 2008年第 25卷第 l1期 一26一 福氏志贺菌外输调节蛋白基因marA的 原核表达载体构建及其鉴定 魏小娟，张继瑜，王松泰，牛建荣，李剑勇，周旭正，吴培星，李金善 (中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州 730050) 摘要 ：目的 构建志贺茵外输调节蛋 白基因marA的原核表达载体并对其表达的蛋 白进行鉴定。方法 采用 PCR从志贺菌基因组DNA中扩增得到志贺茵外输调节蛋白基因marA．并将其定向克隆到原核表达载体pET一30a， 构建原核表达重组质粒pET-30a—marA．重组子经限制性内切酶分析、PCR及测序鉴定后 ，转化宿主茵BL21，IPTG 诱导表达．产物进行SDS—PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果 经鉴定证实原核表达载体pET一30a—marA构建成 功．且在大肠杆茵BL21中获得 了MaIA与His的融合表达 。且表达蛋 白产物的分子质量大小与预期值一致 ，并可被 特异性抗体所识别 结论 MarA在大肠杆菌中获得 了高效的表达．为进一步研究其免疫学特性和功能奠定了基础。 关键词 ：志贺茵；marA；原核表达 中图分类号：$852．612 文献标识码 ：A 文章编号：1005—944X(2008)11-0026—03 Construction and expression ofa prokaryotic expression vector encoding effiux pump regulated protein gene marA ofShigellaflexneri WeiXiao-juan，ZhangJi-yu，WangSong-tai，NiuJian—rong，LiJian—yong，ZhouXu—zheng，WuPei—xing，LiJin—shan fLanzhouInstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryPharmaceuticalSciences，Gansu，Lanzhou，730050) Abstract：Objective Toconstructaprokaryoticexpressionvectorencodingan effluxpumpregulatedprotein MarA ofshigella ．andexpressthevectorin E coliBL21．M ethodsThemarA genewasamplified from thegenom- iCDNA ofShigella with PCR．and then was inserted into theprokaryotic expression vectorpET一30a，to consturct theprokaryotic expression recombinantplasmidpET一30a—marA．Afteridentification with restriction enzymeanalysis． PCR and nucleotide sequencinganalysis．theE,coliBL2lcontaining the recombinantplasmid pET一30a—marA was induced with IPTG．The expression ofMarA was subsequently detected by SDS—polyacrylamine gelelectrophoresis and Western—blotanalysis．Results Th eprokaryotic expression vectorpET一30a—marA wasconsturcted successfully． TheE．coliBL21transformedwiht recombinantplasmid pET一30a—marA had expressed His—MarA recombinantpro- tein．Theexpression productcouldreactwith thespecificantibody，andtherelativemolecularweightoftheexpres- sionpro