肝硬化患者外周血IP-10及其mRNA表达.pdfVIP

现代预防医学2008年第35卷第8期 Modern Preventive Medicine，2008，VoL35，NO．8 · l53l · 4 4 3 3 ， ，一 将分离的PBMC．以1640完全培养液调整细胞数至 (1～2)X 1：5稀释。趋化因子引物设计参照Hirata等方法进行．I． ，IP- 10 个／rnl悬液；以Trizol试剂抽提 PBMC总RNA．并逆转录 10引物序列和扩增片段长度见表 1。Real—time PCR扩增参数 为cDNA．置一86 冰箱备检。以SYBR Green I荧光标记法检 如下：95 预变性 300 S．然后95 50 S．55 40 S．72℃90 测 PCR产物，总反应体系25 ，包括上下游引物各 10 pM， S共 35个循环，最后延伸 300s。以甘油醛一3一磷酸脱氢酶 MgCL 2．5 mM，Ex—Taq 1：25 U．0．2 mM dNTPs．1xPCR buffer (GAPDH)为内对照．以lg cDNA／lg GAPDH比值代表其 mR (500 mM KC1，100 mM Tris，20 m#ml gelatin，pH 8．3)，2x NA水平。 SYBRTM Green I液。2 标准品或模板cDNA，模板cDNA以 表l HBV及 10引物序列和扩增片段长度 1．4 标准品和标准曲线制备 M 1 2 3 4 5 6 以GAPDH为内参标准，为确定定量扩增的效率和灵敏 度，将起始浓度为 (1 o6 copies／~1)的GAPDH，按 1：10设6 个梯度浓度，即 106 copies／lxl、105 copies／~l、10 copies／~l、 10 copies／pJ和 102 copies／~l、0。 1．5 统计学分析 6fx) IP一10及其mRNA水平以 ±s表示；采用SPSS11．5软件 500 400 分析，对数据进行t或t 检验，Excel相关分析显示相关系数 3f)o r，P0．05有统计学意义。 21)0 lf)《_) 2 结果 2．1 肝硬化患者IP一10及其mRNA表达 注j 1，3，5：GA[ D[t；2．4，6：1P一10；l，2：对照者 3，4：患者 (代偿期)：5，6：患者f失代偿早期) HBV感染后肝硬化患者外周血IP一10及其 mRNA水平高 于正常献血员 (P0．01)，见图1，失代偿期的表达高于代偿 图2 PBMC内IP一10 mRNA表达 期，差异无统计学意义 (P0．05)，见图1、2。 融正常组 髓代偿蝴 360