慢病毒介导的外源基因体外投递系统的建立.pdfVIP

· 1028 · JournalofTropicalMedicineVo1．8No．10Oct．2o08 文【章编号】 1672—3619(2008)10—1028—02 · 基 础 研 究论 著 · 慢病毒介导的外源基因体外投递系统的建立 贾俊双 ，孙妍 ，肖东 ，姚开泰 ¨ (1．南方医科大学肿瘤研究所，广州 510515； 2．南方医科大学比较医学研究所暨实验动物中心，广州 510515) 【摘要】 目的 针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系，以建立慢病毒介导的外源基因体 外投递系统。方法 按 Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带 EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转 染)、超速离心浓缩和保存等，随后用病毒上清或浓缩后 的病毒感染293YF细胞 ，24—48h后荧光显微镜下观察 是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产 ：将携带 EGFP基因的病毒上清或浓缩后的病毒分别加入内含293FT 细胞、小鼠Es细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)或小鼠睾丸生殖细胞的培养板孔内，感染6—12h后，用相应培 养基替换感染液 ，数天后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光 以证实慢病毒是否成功感染不同哺乳类细胞。 结果 按标准程序生产的携带 EGFP基因慢病毒 (病毒上清或浓缩后的病毒)成功高效率感染293F1细胞 、 MEFs或小鼠睾丸生殖细胞：用浓缩后的病毒(携带 EGFP基因)感染小鼠Es细胞，亦可获得EGFP阳性的Es细 胞克隆。结论 熟练掌握了慢病毒包装、浓缩及鉴定等技术 ，同时针对不同哺乳类细胞建立了相应的慢病毒介 导的外源基因体外传递系统，这些为相关后续研究打下了良好的基础。 【关键词】 慢病毒；293FT细胞；小鼠胚胎干细胞；小鼠胚胎成纤维细胞；小鼠睾丸生殖细胞 中图分类号：R34 文献标识码：A EstablishmentofLentivirus-M ediatedin VitroGeneDeliverySystem JIA Jun—shuang，SUN Yan，XIAODong2，YA0Kai—tai’ (．CancerResearchInstitute，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515； 2．InstituteofCompraativeMedicineandCenterofExperimentdAnimals，SouthernMedcial University，Guangzhou510515，China) A【bstract】 Objective Toestablishthelentivirus—mediatedinvitrogenedeliverysystemsfordifferent mammalian cells．M ethod Accordingtothestandardprotocolfrom Invitrogen，lentivirusescarrying EGFP genewere producedor／and concentrated， followedbyconfirmingthatlentivirusesharboringEGFP geneweresuccessfullymade throughEGFP assayunderfluorescentstereomicroscopeafterinfecting293F1cells． Basedon thedifferentinfecting protocols，lentivirusesharboringEGFPgenewereemployedtoinfectthedifferentmammaliancells[i．e．，293Frcells， mouseemb~onicstemcells(mEScells)，mo