sirna沉默pkm2抑制人胃腺癌sgc-7901细胞增殖能力和 - 胃肠病学.pdf

·４５８· ＣｈｉｎＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１４，Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ８ ｓｉＲＮＡ沉默 ＰＫＭ２抑制人胃腺癌 ＳＧＣ７９０１细胞 增殖能力和糖酵解水平 朱　珠　陈　敏　张晓琦　张　斌　丁希伟　杨　燕　邹晓平＃ 南京大学医学院附属鼓楼医院消化科（２１０００８） 　　背景：Ｍ２型丙酮酸激酶（ＰＫＭ２）在肿瘤组织中呈特异性高表达，与肿瘤的生长和糖酵解水平密切相关，是潜在 的治疗靶点。目的：探讨ｓｉＲＮＡ沉默ＰＫＭ２对胃癌ＳＧＣ７９０１细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭以及糖酵解水平的影响。 方法：选择未转染ＳＧＣ７９０１细胞、转染空质粒ｐＵ６ＳＧＣ７９０１细胞以及转染ＰＫＭ２ｓｉＲＮＡ的ＳＧＣ７９０１细胞，采用蛋 白质印迹法和ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ检测ＰＫＭ２ｍＲＮＡ和蛋白表达；免疫荧光法检测ＰＫＭ２在细胞内的表达和分布；ＣＣＫ８ 法、流式细胞分析、细胞迁移和细胞侵袭实验检测细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭能力；蛋白质印迹法、分光光度法 分别检测葡萄糖转运蛋白１（Ｇｌｕｔ１）、乳酸脱氢酶Ａ（ＬＤＨＡ）蛋白表达以及葡萄糖、乳酸浓度、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活 性。结果：与其余两组相比，ＰＫＭ２ｓｉＲＮＡ转染组细胞ＰＫＭ２ｍＲＮＡ和蛋白表达明显下降（Ｐ＜０．０５），胞内表达明显 减弱，细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降，细胞凋亡明显增加（Ｐ＜０．０５），Ｇｌｕｔ１、ＬＤＨＡ蛋白表达明显下降（Ｐ＜ ０．０５），葡萄糖摄取率、乳酸产量、ＬＤＨ活性明显减低（Ｐ＜０．０５）。结论：ＲＮＡ干扰能抑制胃癌ＳＧＣ７９０１细胞ＰＫＭ２ ｍＲＮＡ和蛋白表达，进而抑制胃癌细胞的增殖能力和糖酵解水平。 关键词　胃肿瘤；　细胞增殖；　有氧糖酵解；　ＲＮＡ干扰；　Ｍ２型丙酮酸激酶 ＳｉｌｅｎｃｉｎｇＰＫＭ２ｂｙｓｉＲＮＡＩｎｈｉｂｉｔｓＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＧｌｙｃｏｌｙｓｉｓｏｆＨｕｍａｎＧａｓｔｒｉｃＡｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａＣｅｌｌＬｉｎｅ ＳＧＣ７９０１　ＺＨＵＺｈｕ，ＣＨＥＮＭｉｎ，ＺＨＡＮＧＸｉａｏｑｉ，ＺＨＡＮＧＢｉｎ，ＤＩＮＧＸｉｗｅｉ，ＹＡＮＧＹａｎ，ＺＯＵＸｉａｏｐｉｎｇ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ＮａｎｊｉｎｇＤｒｕｍＴｏｗｅｒＨｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＭｅｄｉｃａｌＳｃｈｏｏｌ，Ｎａｎｊｉｎｇ （２１０００８） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅｔｏ：ＺＯＵＸｉａｏｐｉｎｇ，Ｅｍａｉｌ：１３７７０７７１６６１＠１６３．ｃｏｍ 　　Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ：ＰｙｒｕｖａｔｅｋｉｎａｓｅＭ２（ＰＫＭ２），ｗｈｉｃｈｉｓｈｉｇｈｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ，ｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎ ｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈａｎｄａｅｒｏｂｉｃｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓａｎｄｉｓａｐｒｏｍｉｓｉｎｇｔａｒｇｅｔｆｏｒｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ．Ａｉｍｓ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇＰＫＭ２ｂｙｓｉＲＮＡｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＳＧＣ ７９０１ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＳＧＣ７９０１ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ：ｎｏｎｔｒａｎｓｆｅｃｔｄＳＧＣ７９０１ｃｅｌｌｓ，ＳＧＣ７９０１ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｅｍｐｔｙｐｌａｓｍｉｄａｎｄＳＣＧ７９０１ｃｅｌｌｌｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＰＫＭ２ｓｉＲＮＡ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＫＭ２ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇａｔｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｓ．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆ ＰＫＭ２ｗａ