人体中可溶性vegfr-2 酪氨酸激酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性 .pdf

第30 卷第3 期 食 品 与生 物 技 术学 报 Vol. 30 No.3 2011年5 月 Journal of Food Scienceand Biotechnology May 2011 : 1673-1689( 2011)03-0475-06 人体中可溶性VEGFR-2 酪氨酸激酶在 大肠杆菌中的表达纯化及活性测定 1 2 2 2 1 * 1 徐 娟 , 王柯 , 杨润琳 , 黄 飚 , 段作营 , 李华钟 ( 1. 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室, 江苏 无锡214122;2. 江苏省原子医学研 所 卫 生部核医学重点实验室, 江苏无锡214063) : 针对人体血管内 生长因子受体2(Vascular endothelial growth factor receptor 2, VEG- FR-2)受体型酪氨酸激酶( Receptor tyrosine kinase,RTK) 进行体外表达, 并对表达和纯化条件进 行优化构建表达VEGFR-2 酪氨酸激酶重组大肠杆菌, 通过研究不同诱导温度IPTG 浓度诱 导时间和超声条件等对蛋白表达的影响, 采用 N-i NTA 亲和层析法Western Blot 法ELISA 方法 对重组蛋白进行纯化鉴定和活性测定成功地将1 000 bp 左右的VEGFR-2 酪氨酸激酶DNA 片段插入载体pQE30 中, 在优化条件下重组蛋白较好地可溶性表达SDS表明重组蛋白 相对分子质量约为36000,与预期 一致,Western Blot 分析表明它能与抗Flk-1和抗His 抗体特异 反应,ELISA 检测结果表明重组蛋白具有利用ATP 催化底物磷酸化的激酶活性通过重组DNA 技术使人体VEGFR-2 酪氨酸激酶在大肠杆菌得到可溶性表达,纯化重组蛋白具有较高的活性 : 可溶性VEGFR-2 激酶;表达;纯化; 活性测定 :Q 786 : A Purification and Identification of the Soluble VEGFR-2 Kinases Expressed in Escherichia coli 1 2 2 2 XU Juan , WANG Ke , YANG Run-lin , HUANG Biao , 1 * 1 DUAN Zuo-ying , LI Hua-zhong (1.Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122; 2. Jiangsu Institute of Nuclear Medicine, Key Laboratory of Nuclear Medicine, Ministry of Health, Wuxi 214063) bstract:To improve the soluble expression of VEGFR-2 tyrosine kinase in Escher ic hi a col i for further study on its biological activity. Different concentrations of IPTG, induci