不同波长光照对母鸡间脑和中脑c-fos基因表达影响.pdf

摘 要 本实验分别采用红（660nm ）、绿（560nm ）、蓝（480nm ）三种发光二极管对 60 只150 日龄白来航蛋鸡进行人工照明，每组20 只。将母鸡右眼遮光7 天后接受 20Lux 的光照刺激1.5h，暗适应1.5h. 经遮光和光照刺激后，用两种方法检测FOS 蛋白：1）免疫组化方法，灌流固定，取脑制作石蜡切片。通过免疫组化方法检测 由不同波长光照刺激引起c-fos 基因在间脑和中脑的表达; 2） 蛋白印迹法，对母鸡 进行光照刺激后，直接断头，将鸡头在冰上迅速冷却，然后在低温环境下剥离出鸡 脑。将剥离出来的鸡大脑用锡纸包好，迅速放于－80℃ 冰箱中冷冻。将冷冻后的 鸡脑捣碎，10000 转/秒离心，提取上清液，测出提取液中的蛋白含量，然后用蛋白 印迹法来验证提取液中是否含有FOS 蛋白，以此来再次验证FOS 蛋白在鸡脑中的 存在。本试验还用免疫组化的方法研究了几种神经肽GnRH、GABA、VIP 和β-END 在不同波长光照刺激下的表达。通过对FOS 蛋白和几种神经肽的检测，阐明由不同 波长光照刺激引起的 c-fos 基因和神经肽在母鸡间脑和中脑的表达的影响及其内在 联系，由此来探究光照对鸡生殖性能,即对母鸡产蛋量的影响，为进一步了解光照 对鸡产蛋的影响机理打下基础。 结果显示，间脑和中脑内有大量Fos 样免疫反应阳性神经元，主要见于左侧， 分布于圆核（Rt ）、室旁核（PVN ）、前背外侧核（DLA ）、外侧膝状核腹侧部（GLv ） 和缰核（HB ）、中央灰质层（SGC ）、峡核大细胞部（Imc ）和小细胞部（Ipc ）、峡 视核（ION ）、半月核（SLu）、中脑外侧核背侧部（MLd ）、红核（RN ）和滑车神经 核（nIV ）等核团内，其中Rt 、PVN 、SGC、Imc 和Ipc 内免疫反应阳性样神经元最 多。并且蛋白印迹法（western blot ）检测的结果显示,49kD 到90kD 间有明显特异 条带，即FOS 蛋白条带，证明在母鸡脑蛋白提取液中有FOS 蛋白存在。不同波长 光照刺激均能引起母鸡间脑和中脑 c-fos 基因的表达，但影响有差异。绿光组比红 光组表达强，普遍差异显著，蓝光组表达介于两者之间。但在GLv 核中红光组比蓝 光组表达强。并且不同波长光照刺激均能引起母鸡间脑和中脑内几种神经肽的表 达，但影响有差异。对于GnRH 和VIP 来说，绿光比红光表达强，普遍差异显著， 蓝光组表达介于两者之间；对于β-END 和GABA 来说，红光比绿光表达强，普遍 差异显著，蓝光组表达介于两者之间。 关键词：母鸡；波长；c-fos 基因；免疫组织化学；神经肽 Effect of different wavelength lights on the expression of c-fos gene in hen diencephalon and mesencephalon Graduate: Zhang Yi Supervisor: Prof. Hu Man Major: Basic Veterinary Science Abstract. 150 days old White Leghorn hens were exposed to red (660nm, R) , green (560nm, G) and blue (480nm, B) light from light emitting diode (LED) lamps in this study. There were 20 hens in each treatment. After wearing a blinder to keep dark for 7 days, the right eyes received a light stimulation of 20Lux for 1.5h and kept in dark again for 1.5h. Following pe