一步法植物活性蛋白质提取试剂盒OneStepPlant.PDFVIP

一步法植物活性蛋白质提取试剂盒 One Step Plant Active Protein Extraction Kit 品编号：C510004 包装规格：20 Assays 品简介 该试剂盒可以在10 min 内从植物组织中提取可溶性活性蛋白质，提取的蛋白质可以用SDS，2D 电泳，Western blotting和免疫共沉淀，Pull Down ，EMSA 等蛋白活性分析以及亲和纯化等。试剂盒含有三种试剂：有机溶剂裂解植物组织， 水溶性试剂溶解蛋白质，DTT稳定蛋白质。 方法已经用拟南芥、番茄、菠菜、豌豆、大豆等植物的叶、根、花和种子实验 过，方法快速有效，可以从20 40mg 新鲜或冻存的植物组织，或者20 10 mg 的干燥的植物组织中提取所需要的蛋白质， h 可以使用20次，由溶液A, B, DTT和蛋白酶抑制试剂组成。 c 品特点 e 1. 方法快速有效，可以在10 min内 成整个实验过程 t 2. 可以从20 40 mg新鲜或冻存的植物组织，或者20 10 mg的干燥的植物组织中提取所需要的蛋白质 3. 可以从各种植物的叶，根，花和种子等植物组织中提取所需要的蛋白质 o 4. 提取的蛋白质可以最大程度的保持蛋白质的活性 i 运输和保存条件 B 常温下运输,收到后将蛋白酶抑制剂，DTT -20℃保存，溶液A和溶液B在常温下保存。同时溶液B还需要避光保存，有效 期一年。 n 品组成 o 成分 C510004 Buffer A g 20 mL Buffer B 20 mL DTT n 0.1 mL 蛋白酶抑制剂 a 25 μL 实验前准备 1. 在每mL的溶液A 中加入1 μL的蛋白酶抑制剂混匀待用。 S 2. 如果植物中含有较多的氧化酶和醌，请加入终浓度为0.05-0.1%的焦亚硫酸，Sodium Diethyldithiocarbamate trihydrate （DDTC 铜试剂）等抗氧化试剂到溶液A 中。 3. 如果植物中含有较多的多酚类化合物，请加入2-3%的PVPP等多酚类化合物吸附试剂。 4. 实验前根据所提取的植物样品的量，将已经加入蛋白酶抑制剂或/和抗氧化试剂或/和多酚类化合物吸附试剂的溶液A990 μL，DTT 5 μL和溶液B 750 μL在涡旋震荡器混匀，直到形成均一的胶体悬浊液，由于 混合液在放置的条件下容易分 层，如果发生分层，请在加入到所提取的植物样品前再次混匀，同时 混合液现配现用，所留混合液最好不要超过一个 星期。 操作步骤 1. 取40 mg新鲜或冻存的植物组织或10 mg的干燥的植物组织煎成细小的碎片，转移到1.5 mL 的离心管中。 2. 加入1 mL 混合液,用塑料研磨棒或匀浆器，进行研磨或匀浆。直到没有没有明显的植物组织团块。 ¸ 充分的研磨或匀浆是必要的，有助于蛋白质的完全释放。 3. 涡旋震荡1-2 min，再4 ℃，8000 rpm （5700 g) 离心5 min，以便于有机相和水相的分层。 4. 将枪头伸入到下层水相中，将含有蛋白的下层水相吸出，转移到一个新的1.5 mL的离心管中，此下层水相中含有植物的 可溶性蛋白。 5. 上层有机相中可能含有蜡，脂肪酸和其它长碳链有机化合物，也可能含有一些高度疏水性的