猪12号染色体显微切割与微克隆分析.pdfVIP

华中农业大学预士论文2003 摘要 本实验以广西巴马小型猪为材料，采用单条染色体显微切割及微克隆方法，建 立了猪12号单染色体微克隆文库，并对克隆予进行了分析。它将为获得位于猪12 号染色体上的探针，建立12号染色体上高密度分子标记连锁图谱以及克隆与分子标 记紧密连锁的重要基因奠定基础。本研究的主要内容及结果如下： 1．猪12号单染色体微细玻璃针法显微切割及其体外扩增实验体系的建立。用微细 蛋白酶K消化及Sau3AI酶切后，与Sau3AI接头连接，并用Sau3AI接头介导 PCR，LA．PCR)进行两轮体外扩增。鉴定结果表明，扩增 的PCR(1inker-adaptor 片段长度在250．1600 bp之间，经Southem杂交分析证明，所扩增片段来自猪基 因组。与前人报道相比，本实验体系微分离染色体精确，易于操作，且费用较低。 用显微切割法微分离与微克隆猪12号单条染色体在国内外尚未见类似报道 来源进行验证，证实扩增产物来源于猪12号染色体。同时从另一方面也证实染色 体微克隆文库中含有大量微卫星序列，具有开发微卫星探针的潜力。 3．猪12号单染色体探针池的建立。采用上述实验体系，对经接头介导的经PCR 文库。对其中随机挑选的克隆子进行分析表明，插入片段大小主要分布在 250．1600 bp，平均大小在500bp左右。该微克隆文库可提供大量猪12号染色体 特异性探针，为该染色体高密度遗传图谱及精细物理图谱的构建，以及一些重要 基因的分离奠定了基础。同时，该实验体系可为同类研究提供研究经验 4．从已建立的猪12号染色体微克隆文库中的克隆予中获得一个含12个(GT)的微 卫星序列， 关键词：巴马小型猪，染色体显微切割和微克隆，LA—PCR，单染色体文库，微卫 星 i 堑：：：銎垒箜昌垡望型耋警毒蜜譬奎 Abstract the Bama miniature oflocalbreedofour Guangxi swine，one country，as Abstract：Using microdissectionand of swinechromosome12was materials，The microcloningsingle carriedout．Thechromosome12 DNA ofswinewasestablishedand specificlibrary researchwillbeusefulforintensivemolecular constructionof analyzed．The linkage map chromosome12andtheisolationof locatedonchromosome12． importantgenes 1．Establishmentofthemethodfor chromosomemicrodissection single using wellas withthe dissected micr091assneedles，asamplification mademitosis ofswine from