ασκησεισ 4 και 12 - e-class.ppt

  1. 1、本文档共20页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
ασκησεισ 4 και 12 - e-class

ΑΝΟΣΟΚΑΤΑΚΡΗΜΝΙΣΗ ΑΝΟΣΟΣΤΥΠΩΜΑ ΚΑΤΑ WESTERN Προετοιμασ?α του Πρωτε?νικο? Δε?γματο? Για να αναλυθο?ν οι πρωτε?νε? με ανοσοστ?πωμα κατ? Western ? ανοσοκατακρ?μνιση θα πρ?πει να εκχυλιστο?ν απ? κ?τταρα ? ιστ? αλλ? και να διατηρηθο?ν σε δι?λυμα. Αυτ? επιτυγχ?νεται χρησιμοποι?ντα? απορρυπαντικ? ?πω? Triton X-100, NP-40, SDS κ.λ.π. συν?θω? σε περιεκτικ?τητα 1% στο κατ?λληλο ρυθμιστικ? δι?λυμα που μπορε? να περιλαμβ?νει 150 mM NaCl, 25 mM Tris-HCI, 2 mM EDTA και αναστολε?? πρωτεασ?ν. Ιδια?τερα στην περ?πτωση τη? ανοσοκατακρ?μνιση?, η επιλογ? του απορρυπαντικο? ε?ναι πολ? σημαντικ? αφο? οι συνθ?κε? πρ?πει να ε?ναι τ?τοιε? ?στε να επιτρ?πουν τη δ?σμευση του αντισ?ματο? στο αντιγ?νο και ?ταν μελετο?νται πρωτε?νικ?? αλληλεπιδρ?σει? το απορρυπαντικ? θα πρ?πει να τι? διατηρε?. ΥΠΟΚΥΤΤΑΡΙΚΟΣ ΕΝΤOΠΙΣΜΟΣ ΠΡΩΤΕ?ΝΗΣ ? ΕΠΙΛΟΓΗ ΔΙΑΛΥΜΑΤΟΣ ΟΜΟΓΕΝΟΠΟΙΗΣΗΣ ΟΛΙΚΟ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑ ?NP-40 or RIPA ΚΥΤΤΑΡΟΠΛΑΣΜΑ (διαλυτ?)?Tris-HCl ΚΥΤΤΑΡΟΠΛΑΣΜΑ (κυτ/σκελετο?)?Tris-Triton ΜΕΜΒΡΑΝΟΣΥΝΔΕΟΜΕΝΗ ?NP-40 or RIPA ΠΥΡΗΝΙΚΗ?RIPA / ΥΠΟΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΚΛΑΣΜΑΤΩΣΗ * ΜΙΤΟΧΟΝΔΡΙΑΚΟ ΚΛΑΣΜΑ ? RIPA / ΥΠΟΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΚΛΑΣΜΑΤΩΣΗ ΕΠΙΤΥΓΧΑΝΕΤΑΙ ΕΜΠΛΟΥΤΙΣΜΟΣ ΤΟΥ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ ΜΕ ΚΛΑΣΜΑΤΩΣΗ ~ ΑΝ ΥΠΑΡΧΕΙ ΥΠΟΚΥΤΤΑΡΙΚΟΣ ΕΝΤΟΠΙΣΜΟΣ !!! ΧΑΜΗΛΑ ΕΠΙΠΕΔΑ ΕΚΦΡΑΣΗΣ π.χ. πυρηνικ? πρωτε?νη Nonidet-P40 (NP40) δι?λυμα: κυτ/κε?, μεμβρ/νε?, ολικ? εκχ?λιση ΜΗ ΔΙΑΛΥΤΗ-ΣΥΣΣΩΜΑΤΩΜΑΤΑ ? ΔΙΑΛΥΜΑ RIPA [ιονικ? απορρυπαντικ?] ? διαλυτοπο?ηση πρωτε?ν?ν RIPA buffer (Radio Immuno Precipitation Assay buffer) 50 mM Tris/HCl pH 7.4, 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1% NP-40, 0.1% SDS ? ολικ? κυτταρικ? εκχ?λισμα, μεμβρανοσυνδε?μενε? πρωτε?νε? κ πυρηνικ? κλ?σμα (vs διαλ?ματα NP- 40 / Triton X100) Προκειμ?νου να διαφυλαχθο?ν αλληλεπιδρ?σει? πρωτε?ν?ν ? να ελαχιστοποιηθε? η πιθαν?τητα μετουσ?ωσ?? του? (διαφ?λαξη επιτ?που που αναγνωρ?ζει συγκεκριμ?νο αντ?σωμα) απαιτε?ται χρ?ση διαλ?ματο? ομογενοπο?ηση? που δε θα περι?χει ιονικ? απορρυπαντικ? (π.χ. SDS) ο?τε και μη-ιονικ? (π.χ. Triton X-100). Στην περ?πτωση αυτ? η κυτταρικ? λ?ση επιτυγχ?νεται με μηχανικ? τρ?πο (ομογ

文档评论(0)

wangyueyue + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档