非标记型血小板衍生生长因子核酸适体传感器.pdf

Vo1．34 高 等 学校 化 学 学报 No．1 2013年 1月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSI_rJES 61～66 doi：10．7503／cjc 非标记型血小板衍生生长因子 核酸适体传感器 赵春玲，华 梅，赵晓慧，黄亮亮，冯亚娟，牛司朋， 符雪文，袁 聪，杨云慧 (云南师范大学化学化工学院，昆明650500) 摘要 合成了介孑L二氧化硅负载金纳米颗粒 (Au—MSN)，通过壳聚糖 (CHIT)将Au—MSN固定到裸玻碳电极 表面，采用 自组装法将带巯基的血小板衍生生长因子(PDGF)核酸适体固定到Au—MSN修饰过的玻碳电极表 面，制得PDGF核酸适体传感器．以亚甲基蓝作为电化学活性嵌入剂，通过检测核酸适体与 目标分析物 PDGF特异性结合前后亚甲基蓝电信号的变化，实现了对 PDGF的定量检测．考察了缓冲溶液的pH、扫描速 度及PDGF培育时间等条件对检测结果的影响．结果表明，在pH为 7．6时，该传感器的检测范 围为0．1 Pg／mL一1~g／mL，检出限为0．03pg／mL．该传感器制作简单、成本低廉、灵敏度高且稳定性好． 关键词 电化学 ；介孔二氧化硅；核酸适体；血小板衍生生长因子(PDGF)；亚甲基蓝 中图分类号 0657．1 文献标志码 A 核酸适体 (Aptamer) 是利用体外筛选技术一 指数富集配基系统进化技术 (SELEX)，从核酸分 子文库中得到的寡核苷酸片段．核酸适体能与多种 目标物高特异性、高选择性地结合 j．与抗体相比， 核酸适体具有体外合成、选择性高、稳定性好且易于修饰等优点．基于核酸适体的电化学传感器在药 物筛选、临床诊断及环境检测等方面具有广阔的应用前景 J．核酸适体电化学生物传感器分为非标记 型和标记型2种．标记型传感器的优点是灵敏度高，缺点是识别物需要标记，操作较繁琐．而非标记 型传感器无需标记、操作简单、实时检测方便、假信号率低且对适体的活性没有损伤． 血小板衍生生长因子_6(Platelet—derivedgrowthfactor，PDGF)是人体血小板中具有双链结构的蛋 白 质生长因子，为促细胞分裂剂，可刺激成纤维细胞和其它多种细胞分裂增殖．其主要由巨核细胞合成， 生理状态下主要储存在血小板的Ot颗粒中，在骨骼和心脏等重要组织器官的病理、生理过程中发挥着 重要作用 J，引起了国内外学者的广泛关注．常见的PDGF检测方法有比色法、荧光法及电化学方法 等 ．Wang等 通过静电吸附作用将电化学探针[Ru(NH)c1] 固定在电极表面，利用金纳米粒 子的信号放大效应实现了PDGF的高灵敏检测，检出限达0．01pmol／L．Lai等 设计了一种用于直接 检测血液中PDGF的电化学传感器，将末端修饰亚甲基蓝 (MB)的PDGF核酸适体固定在金电极表面， 此时核酸适体处于半折叠状态，电流信号较小；当核酸适体与 目标物结合后，MB与电极表面的距离缩 短，电流信号变大．该Signa1．on传感器在实际样品检测中显示出良好的稳定性，对血样和稀释血样中 PDGF的检出限分别达到 1nmol／L和50pmol／L．Degefa等 ¨以[Fe(CN)] 一为电活性物质研制了 非标记型PDGF核酸适体传感器，将核酸适体固定在金电极表面，当没有 目标物时，核酸适体作为传 感层处于一种活泼的结构，不影响电活性物质和电极间的电子传递；当与 目标物结合之后，核酸适体 折叠，紧密的结构阻碍了电子传递，使电流减小，即Signa1．off型．俞汝勤等 ¨ 在该领域开展了一系 列创新性的工作，首次提出了滚环扩增效应(RCA)在电化学法检测蛋白质(如PDGF)方面的应用，并 将实验数据与经典酶联免疫法(ELISA)数据进行比较，相对偏差很小，取得了一定的成果． 收稿 日期：2012-04—19． 基金项 目：国家 自然科学基金 (批准号 21165023)资助． 联系人简介