平成26年度临床医学ユニット研究活动状况-関西医疗大学.PDF

平成26年度　臨床医学ユニット研究活動状況 平成26年度　臨床医学ユニット研究活動状況 た。当初、SMONの難治性疼痛に関して解析を行うた A．構成メンバー め、脊髄後角細胞で実験を行ったがキノホルムに対する 吉田　宗平、横田　栄夫、郭　　哲次、近藤　哲哉、 応答にばらつきがあることから、痙性麻痺や脱力に注 紀平　為子、黒岩　共一、山本　博司、谷口　　亘、 目して脊髄前角細胞における作用を解析した。膜電位 池藤　仁美、鍋田　理恵、百合　邦子 は-70mVに電位固定してEPSCを観察した。キノホルム 100µMの灌流投与を行うと、EPSCの振幅の増強は認め B．ユニットの研究活動について なかったが、頻度の有意な増強を認めた。この効果は Ⅰ．脊髄後角におけるTRPA1の活性化による 10 µMよりも強く、亜鉛添加でキレート化することで 痛覚伝達抑制作用（谷口） キノホルム単独時より増強した。次にキノホルムのシナ 　温度感受性イオンチャネルであるTRPチャネルは プス前作用を解析するためにNa+チャネル拮抗薬であ 近年, 新たな鎮痛薬のターゲットとして注目されてい るテトロドトキシン存在下でキノホルムを投与したとこ る。しかし、脊髄後角においてどのような中枢性の役 ろ、微小興奮性シナプス後電流の頻度の有意な増幅が観 割を果たしているのかは依然として不明である。今回、 察された。さらにグルタミン酸受容体拮抗薬のCNQX TRPチャネルの中でも冷刺激に反応するとされている 存在下ではEPSCは完全にブロックされ、キノホルム TRPA1に注目し、脊髄後角レベルにおける生理的作用 を投与しても変化はみられなかった。 次にキノホルム についてin vivo パッチクランプ法を用いて電気生理 因性の酸化ストレスの関与を調べるため、活性酸素種 学的に解析した。膜電位は-70mVに電位固定して興奮 （reactive oxygen species ： ROS）の非選択的消去剤で 性シナプス後電流（excitatory postsynaptic current： あるPBNによるキノホルムのEPSC増強作用が抑制で EPSC）、0mVに電位固定して抑制性シナプス後電流 きるか検討した。また、ROSのシグナル伝達に関与す （inhibitory postsynaptic current：IPSC）を観察した。 るTRPA1受容体の選択的拮抗薬であるA-967079存在下 TRPA1選択的作動薬であるAllylisothiacyanete（AITC） においても投与実験を行った。PBNあるいはA-967079 を灌流投与するとEPSC・IPSCともに有意な増強を認 存在下ではキノホルム単独投与時群の頻度の増加率に対 めた。しかし、IPSCはAITCによってほとんどの細胞 して有意差は認めず、これらでは抑制効果は認めなかっ で増強したが、EPSCについては50%程度であった。ま た。以上の結果から、キノホルムは脊髄前角細胞に入力 たAITCに反応して増強していた時間もIPSCの方が する神経線維終末部に作用し、興奮性神経伝達物質グ EPSCより有意に長いことが判明した。また、AITC灌 ルタミン酸の放出を増強した。その作用は濃度依存性 流時の静止膜はより過分極になることが判明した。さら でキレート化により増強した。この作用機序はROSや に記録細胞の受容野の皮膚に触刺激