豚鼠过敏性休克中性蛋白酶活力测定.pdfVIP

山西医药杂志2008年3月第37卷第3期 Shanxi Med J。March2008，Vo1．37．No．3 · 基础研究· 豚鼠过敏性休克中性蛋白酶活力测定 山西医科大学法医学院(03O001) 赵 杰 高彩荣 王英元 过敏性猝死(sudden death of hypersensitivity)指过敏体 专性底物BAPNA。BAPNA以20 mg／mL溶于二甲基亚 质者在接触过敏原后短时间内发生过敏性休克而突然死 砜，取4|D ，加入含待测液的1．5 mL 0．1 mrr~／L反应缓 亡。过敏性猝死在临床医学及法医学鉴定中较为常见，近 冲液中，反应缓冲液为Tris- (pH 7．4)。30℃反应20 年来涉及过敏性猝死的法医学鉴定占到了医疗纠纷法医学 min后，加入0．5 mL 30％(体积／体积)乙酸终止反应；在 鉴定的10％左右【2J。由于它发病突然，难以预见，且危及 405 nnl测吸光度(A)值。以反应缓冲液做参比调零。相 生命，常规尸检无特异性病变，多年来是法医学鉴定中的一 对酶活力单位采用下述公式计算A特测／A标准l0o【5J。蛋白 大难题。目前法医学鉴定过敏性休克多采用排除法，结合 质含量以牛血清白蛋白为标准蛋白，用紫外分光光度计 用药史来确定。过敏性休克属于速发型变态反应，是IgE (280 nm)进行测定。 介导的I型变态反应最危重的一种。工型变态反应中，肥 1．5 类糜蛋白酶活力测定方法：采用酶标仪，使用SAAPP 大细胞脱颗粒，释放过敏介质是引起致命的休克反应的重 作为底物(0．7 mmol／L)，用96孔平板，反应体积为 100 要环节。过敏介质主要包括组胺，LTs、血栓素A2(TXA2)、 止，含有0．3 mmol／L的Tris-HCI(pH 8．0)，加入样品开始 前列腺素(P( )等，但这些活性物质半衰期极短，几秒到几 反应，同时在410 nnl连续监测A值的变化。每个酶活力 分钟，死后极不稳定，且测定方法复杂，难以在法医检案中 单位定义为25℃每分钟水解1 vmol／L底物所用的酶量。 有效应用t 2l。肥大细胞脱颗粒反应的同时释放特异性中性 标准品中类糜蛋白酶活性为166．7 nkat。抑制剂实验：在 蛋白酶(neutral proteases)，因其具有高度的选择性及敏感 反应平板中分别加入SBTI el—AT后再加入酶，最后加底物 性，故而通过测定中性蛋白酶诊断过敏性休克已成为研究 并立即监测A值的变化 。 热点。本实验拟用生化酶学方法测定组织和血清中类胰蛋 1．6 统计学处理：实验组同对照组均数比较用t检验。 白酶(trypt~e)和类糜蛋白酶(chymase)活力，建立一种灵 2 结 果 2．1 致敏豚鼠休克模型的观察：实验组豚鼠于抗原攻击后 敏、简单的检测方法，以利于过敏性休克的诊断。 30 S开始出现活动减少，继而躁动，呼吸困难，四肢软弱，抽 1 材料与方法 搐，最后死亡。死后剖检，见心包无填塞，心脏停止于舒张 1．1仪器和材料：721分光光度计(上海第三分析仪器 期，肠系膜血管扩张充血以及肺水肿。组织学检查发现，肺 厂)。紫外分光光度计(日本岛津)。酶标仪(美国Molecu— 血管明显扩张出血，肺水肿合并肺气肿，肝小静脉扩张等休 lar Oe~ce8 340F~型)。 N_苯甲酰 DL-精氨酸一p-硝基苯胺