机物的分离与纯化方法.pptVIP

六）薄层色谱分离提纯 比柱色谱更加应用广泛的分离分析手段。 用于分离提纯具有简单快速的特点。分离容量不及柱色谱大，效果也不及柱色谱好。 薄层分类：吸附与分配色谱， 分配色谱又分正相色谱与反相色谱。 正相：含水吸附剂（固定相），弱极性流动相，极性小的移动快。 反相：钝化吸附剂（固定相），强极性流动相，极性强的移动快。 * 薄层吸附色谱 1、固定相：硅胶、氧化铝活化。 a加石膏为G型，不加为H型，加荧光剂为GF或HF b正相分配色谱：纤维素或用缓冲水溶液处理过的硅胶、或用极性有机溶剂处理过的硅胶。 C、反相分配色谱固定相：用硅酮、石蜡等非极性溶剂处理过的硅胶或纤维素。 D、薄层涂层：薄层自然晾干后进行活化。 E、活化温度与时间： 硅胶板105-120℃，1h； 氧化铝板：70℃，40min。 * 2、吸附剂选择 吸附剂 用途 吸附剂 用途 硅胶 吸附，分配 氧化铝 吸附，分配 硅藻土 分配 纤维素 分配 氢氧化钙 吸附 聚酰胺 吸附 离子交换树脂 离子交换 氧化镁 吸附，分配 吸附剂粒度的要求：5-50μm。 粒度太大推进快，影响分离； 粒度太小则展开慢，出现拖尾或横向扩散过度。 * 3、制备薄层板的参数 薄层板规格 20×20cm，20×15cm，10×20cm，10×15cm，7.5×20cm，7.5×15cm，5×20cm，5×15cm。 制板：皂液洗净，烘干备用。 浆液与活化 硅胶G:水=1:2（W∶W），110-130℃，1h 氧化铝G:水=1:1～1:3 （W∶W） ，80-100℃/30min 硅藻土G:水=1:2 （W∶W） ，110℃，30min 纤维素粉:95%乙醇（丙酮）=1:5～1:6 （W∶W） ，100℃，3-5min 聚酰胺:甲醇=1:4～1:6 （W∶W） ，60-70℃，1h。 * 4、薄层板的制备 制浆：按照比例将吸附剂和相应的液体加入烧杯，搅拌均匀。 铺板：一般将均匀浆液适量倒在薄板上，两手指夹薄板两侧，旋转倾斜，让浆液在薄板上流均匀，也可以适度敲击震荡，使浆液流平。 或者将两板贴紧，插入浆液中，在提起，让多余浆液流下，一次可以制备两块板。 还有用涂布器铺板的。 薄板铺好后置平台自然晾干，活化备用。 * 5、展开剂选择 与淋洗剂标准一致。官能团极性如下： RH＜RCl＜—CH=CH2＜ROCH3＜RNO2 ＜RNMe2＜RCOCH3＜RCO2R＜R2C=O ＜RCHO＜RSH＜RNH2＜RNHCOR ＜ROH＜RCONH2＜RCO2H 一般单一展开剂没有很适合的极性，多用相容的展开剂混合，以调节展开剂极性。 * 6、被分离物质、淋洗（展开剂）及固定相的极性选择关系 圆弧内三角形可以绕圆心转动，其三个角顶点分别指向三类物质的极性区限。采用混合溶剂调节极性。 弧线A代表吸附剂的活性， 弧线B代表展开剂的极性， 弧线C代表被分离物 质极性，都顺箭头方向增大。 三角形的三个角所指位置 是三者的关系。 * 7、一般薄层色谱实验操作 点样—展开—显色—计算Rf值 点样：在距薄板下沿1cm处的水平线上，毛细管口液滴与薄层表面相切，切忌玻璃管戳破薄层，可以重复点样。 展开：薄层板下沿水平插入层析缸，展开剂不能淹没样点，缸内充满展开剂蒸汽，要盖上盖子，展开剂水平线上升，接近薄层上沿时为止。 显色：大多物质要进行物理或者化学方法显色。 薄层板从层析缸取出，在展开剂前沿作一记号，待展开剂挥发干后显色。 物理方法：紫外灯照射；碘蒸汽熏蒸等。 化学方法：可以产生有色物质的反应。 * 几种点样方法 直接点样 离下沿1.5-2.0cm处毛细管分次点样≤0.3 cm。 间接点样 打孔器打滤纸片2-3mm直径，试液点满纸片，晾干； 打孔器打薄层2-3mm的孔，纸片嵌入。 试样液用打孔器打下的吸附剂吸收，干后填入孔中； 薄层上挖一条水平沟槽，试样液用吸附剂吸收，干后填入沟槽（展开后是平行带状） * 8、等温吸附线与分离效果的关系 恒温下以展开相浓度为横坐标，吸附相浓度为纵坐标作图，得到等温吸附曲线。 曲线中，A物质斜率大，被吸附作用强，展开速度慢，Rf值小。 Ⅰ是理想状况，显色后是标准圆斑； Ⅱ和Ⅲ出现“拖尾”现象，分离效果不好。 、 Ⅰ Ⅱ Ⅲ * 9、影响Rf的因素 薄层厚度 吸附剂种类、活度、展开剂极性、展层的饱和度 展开方法：一般不加黏合剂，薄板水平展开。 单向上行一次展开，倾角70-80° Rf值接近的物质要多次单向展开。每次可用同一展开剂，也可