要点抗生素生.pptVIP

砂土管 黄沙：土 = 1：1（沙和土都经处理，水洗至中性，烘干，研细，过筛） 每管装一定量的砂土，塞好棉塞包好，121℃高压蒸汽灭菌后再用160 ℃ 干热灭菌2h 每支砂土管加0.3mL孢子悬浮液，包好，放入装有干燥剂的真空干燥剂内抽干6-12 h，轻轻敲打使其均匀。完后，放入装有干燥剂的密闭瓶内，0-4℃贮藏 * 斜面 250 ml茄子瓶 麸皮4%，麦粉2%，琼脂2% * 一级种子 400-500L夹套 二级种子 4m3（搅拌） * 发 酵 15%接种量 培养基： 碳源：淀粉 经α-淀粉酶液化 氮源：黄豆饼粉，硫铵 无机盐：KH2PO4，NaCl ，CaCO3，CoCl2 生长因子：酵母粉，玉米浆 * 采用中间补料，延长抗生素分泌期，是提高抗生素产量的重要方法。土毒素生产过程采用补糖与补氨，以保证其在分泌期有足够多而不过多的养料。 总糖 前期 0-80 h 6.5-8% 中期 80-120 h 5-6.5 % 后期120-140 h 4-5 % 末期 140 h后 4% 放罐残糖3%以下，放罐前24 h不补料 * 补氨同时为调pH，pH=6.0-6.3，放罐前8 h停止通氨，整个过程通氨水总量350-400升 * 预处理 土霉素能和发酵液中钙盐、镁盐 ，某些有机胺、蛋白质形成不溶性化合物，积聚在体内。 预处理目的为： 1）使部分土霉素溶液解出来 2）蛋白质（菌丝）沉淀 3）Fe3+沉淀 * 提取工艺 发酵液 酸化液+低单位套液 稀释液 净化液 加草酸及盐酸酸化pH1.7 并加适量黄血盐，搅30′ (26000 r/ml) 稀释到7500-8000 r/ml 加黄血盐及硫酸锌 净 化 板框过滤 滤液（土霉素草酸） 滤渣（草酸钙、蛋白质、菌体、 铁络合物） * 滤液 脱色液 土霉素↓ + 草酸 湿晶体 成品 板框过滤 离心 氨水调pH4.1-4.7 搅50′ 气流干燥 80-90oC 离子交换 122# * 抗生素生产的工艺过程 菌种 ? 孢子制备 ? 种子制备 ? 发酵 ? 发酵液预处理 ? 提取及精制 ? 成品包装 * 菌 种 来源于自然界，获得能产生抗生素的微生物，经分离、选育和纯化后即称为菌种 菌种的保藏：冷冻干燥、超低温冷冻、砂土管、液体石蜡、斜面低温保藏 * 孢子制备 将保藏的处于休眠状态的孢子，接种至固体斜面培养基，在一定温度下培养5-7或7日以上 进一步用扁瓶在固体培养基上扩大培养 * 种子制备 目的使孢子发芽、繁殖以获得足够数量的菌丝，并接种到发酵罐中 摇瓶或直接将孢子接入种子罐逐级放大培养 种子培养定时取样作无菌试验，观察菌丝形态，测定种子液中发酵单位和进行生化分析 种子级数 * 培养基的配制 碳源 氮源 无机盐类 前体 * 碳 源 供给菌种生命活动所需能量，构成菌体细胞及代谢产物 参与抗生素的生物合成 常用碳源：淀粉、葡萄糖及油脂 * 氮 源 构成菌体细胞物质和含氮代谢物 参与含氮抗生素合成 有机氮源 无机氮源 * 无机盐和微量元素 同其他微生物 * 前 体 菌体利用其构成抗生素分子中的一部分而其本身没有显著改变的物质 一定条件下控制菌体合成抗生素的方向并增加抗生素的产量 * 发 酵 目的是使微生物大量分泌抗生素 接种10% 通气 搅拌 控制罐温 消泡 控制pH 定时采样进行生化分析、镜检，测定菌体浓度、残糖量、抗生素含量等 * 发酵液的过滤和预处理 分离菌丝、去除杂质 预处理：去除高价无机离子和蛋白质 过滤：去除固形物及菌体 * 发酵液的预处理 草酸及磷酸去除高价离子钙、镁，还能促使蛋白质凝固 黄血盐有利于去除铁离子 硫酸锌有利于凝固蛋白质 等电点法、加热法、絮凝法去除蛋白 * 发酵液的过滤 板框过滤机 鼓式真空过滤机 自动出渣离心机 倾析器 * 抗生素的提取 溶媒萃取法 离子交换法 直接沉淀法 * 抗生素的精制 药品生产符合GMP规定 脱色及去除热原质 结晶和重结晶 * 脱 色 色素是发酵过程中产生的代谢产物，与菌种及发酵条件有关 活性炭脱色 * 热原质 在生产过程中由于被污染后由杂菌