关于03微生物代谢调节和代谢工程(新).pptVIP

（二）扩展代谢途径 在引入外源基因后，使原来的代谢途径向后延伸，产生新的代谢产物 使原来的代谢途径向前延伸，可以利用新的原料合成代谢产物 A B D E E * 酿酒酵母不能直接利用淀粉产生乙醇 将淀粉酶基因克隆转化后，表达效率很低 用巴斯德毕氏酵母抗乙醇阻遏的醇氧化酶基因启动子表达淀粉酶基因，效率较高 * （三）转移或构建新的代谢途径 克隆少数基因，使原来无关连的两条代谢途径联系起来，形成新的途径，合成新的产物 将催化某一代谢途径的基因组克隆到另一微生物中，使之发生代谢转移，产生目的产物 * 1. 转移代谢途径 真氧产碱菌（Alcaligenes eutrophus）可产生聚羟基丁酸（PHB）和聚羟基烷酸（PHA） 将A. eutrophus PHB多聚酶、硫解酶和还原酶基因在内的 PHB 操纵子一起克隆到大肠杆菌中 A B D G 新途径 H * 2. 构建新的代谢途径 将质粒定向插入Saccharopolyspora eryfhraea的编码红霉素合成途径中第一个酶 reyF 基因中 使该菌合成一种新的抗生素 6-脱氧合霉素A 在胃中低 pH 中比合霉素稳定 * 作业：如何区分酶合成调节和酶活性调节。 * 中间体：是指养分或基质进入一途径后被转化为一种或多种不同的物质，它们均被进一步代谢，最终获得该途径的终产物。 前体与中间体：有时它们指同一物质。 * Production Process of L-Glutamic acid Sketch of main reaction in Corynebacterium glutamicum Connected with the citric acid cycly * 不通发酵条件对谷氨酸产生菌代谢方向的影响 发酵条件 代谢方向 通气 乳酸或琥珀酸 谷氨酸 NH4+ a-酮戊二酸 谷氨酸 谷氨酰胺 生物素 乳酸或琥珀酸 谷氨酸 适量 适量 适量 不足 不足 不足 不足 适量 * 2．添加生物合成的前体 合成途径中增加其中一个前体的量，可以大幅度提高发酵产量。 前体：某些化合物在加入培养基后，能够直接在生物合成过程中结合到产物分子中去，而自身的结构并未发生太大变化，这类小分子物质称为前体。 * PEP 色氨酸合成途径 邻氨基苯甲酸 色氨酸 邻氨基苯甲酸 反馈抑制 3-脱氧-2-酮-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-P 4-P-赤藓糖 * 3、其他条件的控制 使用诱导物---- 生产相关酶类时，可以加入相应的底物作为诱导物，可以有效增加这些酶的产量。 培养基成分和浓度的控制----- 尽量避免由于培养基的不当使用引起的分解代谢阻遏。在发酵培养基中通常采用适量的速效和迟效碳源、氮源的配比。 * （二）改变细胞透性 发酵过程中，可以控制使用那些影响细胞膜通透性的物质作为培养基的成分，有利于代谢产物分泌出来，从而避免了末端产物的反馈抑制调节。 * 1. 通过生理学手段控制细胞膜渗透性 2. 通过细胞膜缺损突变控制细胞膜渗透性 生物素 谷氨酸 细胞膜渗透性 青霉素 谷氨酸 油酸缺陷型 油酸 * （三）菌种遗传特性的改变 改变微生物的遗传特性，即改变酶的活性或酶的合成系统，使之对反馈调节不敏感，达到过量生产代谢产物的目的。 用于这样生产的菌株多为抗反馈调节突变株和营养缺陷型菌株。 * 天冬氨酸 天冬氨酸磷酸 天冬氨酸半醛 赖氨酸 苏氨酸 甲硫氨酸 高丝氨酸 AK HSDH * 应用抗反馈调节突变株解除反馈调节 抗反馈调节突变株：对反馈抑制不敏感或对阻遏有抗性或兼而有之的菌株。 反馈抑制或阻遏或两者解除。 * 分解途径 合成代谢 苏氨酸合成 培养基中苏氨酸类似物 抑制或阻遏解除 * 利用营养缺陷型突变株生产的氨基酸 产物 菌株 营养缺陷型 基质 效价（g/L） L-瓜氨酸 枯草杆菌 精氨酸 葡萄糖 16 L-赖氨酸 谷氨酸棒状杆菌 苏氨酸，蛋氨酸 葡萄糖 50 L-尿氨酸 谷氨酸棒状杆菌 精氨酸 葡萄糖 25 L-苯丙氨酸 石蜡棒状杆菌 酪氨酸 正烷烃 1