要点抗真菌药物敏.pptVIP

微量液体稀释法 试验步骤 1. 采用96孔U型板，每排1～10孔依次加入不同浓度待测药物工作液100 μl ，第1孔为最高浓度，第10孔为最低浓度。 2. 在1～10孔加入100μl菌工作液，第11孔中加入100 μl无菌不含药物的培养基和100 μl菌工作液，作为生长对照；12孔仅加入无菌不含药物培养基作阴性对照。 3. 培养板置于35℃孵育。根霉在培养21～26小时后，镰刀菌、曲霉和孢子丝菌在46~50小时，波氏假阿什利菌70～74小时后读取结果。 * 微量液体稀释法 结果判读 结果判读以生长对照孔作为标准，将生长情况进行评分。 0：完全透明清澈或无生长； 1：少量生长，大致相当于生长对照孔的25％ 2：生长明显减少，相当于生长对照孔50％ 3：生长轻度减少，相当于生长对照孔75％ 4：无明显生长抑制，与生长对照一致 * 微量液体稀释法 结果判读 1. 两性霉素B 终点易判断，以评分为0的最低浓度为MIC 2. 氟胞嘧啶和唑类药物 以评分为2的最低浓度作为MIC 3. 伊曲康唑及其他三唑类 一般终点容易判断，以评分为0的最低浓度作为MIC。如出现终点判断困难，提示该菌在临床中可能耐药。 * 微量液体稀释法 结果判定：目前MIC与菌株耐药情况的关系尚不清楚。 1. 两性霉素B：多数条件致病丝状菌的MIC值为0.5~2.0μg/mL。但某些菌株如土曲霉、局限枝顶孢霉、尖端赛多孢子菌和多育赛多孢子菌等MIC可达2.0~16 μg/mL 。临床治疗提示，曲霉MIC≥2.0 μg/mL时，可导致两性霉素B治疗失败。 2. 氟胞嘧啶：除少数曲霉属和暗色孢科以外，多数丝状真菌不敏感，MIC64 μg/mL。 * 微量液体稀释法 结果判定 3. 氟康唑：除少数双相真菌和皮肤癣菌外，多数丝状真菌不敏感，MIC64μg/mL。 4. 酮康唑：丝状真菌MIC波动于0.0313~16 μg/mL ，但目前尚缺乏MIC值与疗效关系的资料 5. 伊曲康唑和新三唑类：初步的资料显示当MIC8 μg/mL时，提示临床该菌对伊曲康唑耐药。新三唑类药物尚缺乏MIC值与临床疗效间关系的资料。 * 试管液体稀释法 操作与微量液体稀释法相似，将培养体系置于试管中，接种菌量约为0.4×104～5×104cfu/mL，35℃培养后观察生长情况。结果判读和判定同微量液体稀释法。 * 液基稀释法 优点：敏感，操作简便， 缺点：适用范围有限，仅适用于产孢丰富的丝状真菌， 而对产孢较少的真菌则较难进行。 * 丝状真菌的其他药物敏感试验方法还包括琼脂扩散法、E试验法等，其操作步骤均可参照酵母样菌方法进行。目前丝状真菌的药物敏感试验仍没有一个广被接受的标准方法，对各种方法得到的MIC值尚没有充分的临床疗效资料与之对应；同时，丝状真菌药物敏感试验中接种菌量确定仍是目前存在的主要问题。尚需进行进一步的试验对各种方法进行再评价。 * 小 结 抗真菌药物敏感试验方法很多，NCCLS采用的液体稀释法，尤其微量液体稀释法，简便易行，结果敏感，而受到大多数专业工作者的欢迎。 微量液体稀释法有其局限性，细菌药物敏感试验显示，液体稀释法相对于传统的琼脂稀释法重复性差。同时，由于缺乏临床疗效和药敏结果间的关系资料，对各种药敏试验方法仍无法作出客观评价。 对于丝状真菌来说，目前尚无一种广被接受的药敏试验方法，如菌量确定的方法等。 这些方面，仍需进一步研究探讨。 * 琼脂稀释法 培养基制备 RPMI 1640培养基: 2倍量:RPMI 1640 20.8g,葡萄糖40g, 以0.33M MOPS缓冲液溶解,调整pH值至6.9~7.1,过滤除菌,置-20℃保存。 HR培养基： 2倍量：29.3g HR培养基，NaHCO3 2.0g，溶于1000mL双蒸水中，调整pH值至7.5，过滤除菌，低温保存。 4％琼脂： 40g 琼脂，溶于1000mL蒸馏水中，高压灭菌15min，备用。 * 琼脂稀释法 菌液的制备 受试菌在SDA中35℃ 培养24小时（念珠菌属）或48小时（新生隐球菌） 取直径约5mm菌落，混悬于5mL灭菌的生理盐水中，涡旋混匀15秒，采用分光光度计在530nm处，调整菌悬液