Co3O4纳米材料的模拟仿真酶特性及在分析检测应用研究.docVIP

　　Co3O4纳米材料的模拟仿真酶特性及在分析检测应用研究 第 1 章 绪论 1.1课题背景及研究的目的和意义 酶是存在生命体中的一种生物催化剂，能高效催化各种生物化学反应[1]。它具有催化效率高、专一性强、作用条件温和等特点，可被应用于生产生活中的各个领域。在轻工业方面，利用木质素酶可除去纸浆中的木质素，从而提高纸的质量，而且还具有环保的优势。在疾病诊断方面，可通过测定体液中相关酶活力的变化进而诊断疾病，例如对乳酸脱氢酶、胃蛋白酶、磷酸葡萄糖变位酶等酶活力的测定，为某些癌症的诊断提供依据；在疾病治疗方面，溶菌酶具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤的功效；在药物制造方面，beta;-酪氨酸酶可以催化邻苯二酚或 L-酪氨酸生成多巴，而多巴是治疗帕金森氏综合征的一种有效药物。在环境方面，可以应用过氧化物酶、漆酶和酪氨酸酶对废水中的有毒有机化合物进行催化降解；用鱼脑乙酚胆碱酶来检测水中很低浓度下的有机磷农药。由于大多数酶是蛋白质，还有少部分属于 RNA[2]，因此它容易在高温、强酸、强碱等情况下失活，也能被水解酶分解，并且提纯困难，价格昂贵。而人工模拟酶则具有易制备、高稳定性和价格便宜等优点，所以人们不断开发具有酶功能的模拟酶体系以便投入到实际应用当中。人们广泛对其活性部位进行了模拟，如金属卟啉化合物及衍生物、其它金属配合物、环糊精及其衍生物等，并且模拟酶对底物的识别和催化功能引起了各国研究者的广泛关注[3-5]。目前除了利用化学手段构建基于分子识别的小分子酶模型体系之外[6-9], 相继发展了诸多大分子仿酶体系[10-12], 如抗体酶 , 分子印迹酶 ,杂合酶和进化酶等。虽然有些模拟酶已经具有较高的酶活性，但很多模拟酶的活性和天然酶相比还有一定的差距。因此，探索更多更好的酶模型和模拟酶是十分重要的。 . 1.2具有模拟酶性质的纳米材料 大部分的酶是蛋白质，具有特定的氨基酸序列，并形成一定的空间结构。而纳米材料的大小与形貌则是可以变化的。纳米材料和酶看似截然不同的两个领域，然而它们在一些方面是相似的，例如大小都处在纳米级、电荷都带有数个至数十个电子以及表面都可以带有一定的官能团等。这些相似之处足以使纳米材料拥有酶的功能。最近几年来，纳米材料模拟酶引起了科研工的广泛关注。目前发现具有模拟酶性质的纳米材料有氧化铁、其它金属氧化物、贵金属、碳材料及其它某些纳米材料。氧化铁纳米材料具有独特的磁性和生物兼容性，可被应用于分离生物大分子、磁共振成像、药物输送和肿瘤热疗等领域。直至 2007 年，Yan 等发现磁性 Fe3O4纳米粒子还具有模拟过氧化物酶的催化性能[17-18]。过氧化物酶是一种氧化还原酶，能催化过氧化氢和一些还原性物质发生氧化还原反应。在H2O2下，Fe3O4纳米粒子能催化过氧化物酶底物发生颜色变化，如催化 3, 3#39;,5, 5#39;-四甲基联苯胺（TMB）产生蓝色，催化二氨基联苯胺（DAB）产生褐色，催化邻苯二胺（OPD）产生橙色（图 1-1），这个催化特性和天然的过氧化物酶类似。研究证明模拟酶的催化能力于其完整的纳米粒子而非溶解出的铁离子，模拟酶的催化能力与温度、pH 和底物浓度等因素有关，对三种不同粒径的 Fe3O4纳米粒子的催化能力进行了比较，发现最小粒径的 Fe3O4纳米粒子具有最高的模拟过氧化物酶催化能力，因此模拟酶的催化能力与粒径密切相关。稳态动力学研究显示双倒数图中的曲线是平行的，这是乒乓机制的特点。因此 Fe3O4纳米粒子的反应属于乒乓机制，即 Fe3O4纳米粒子首先和一个底物反应，并释放一个产物，然后再结合第二个底物，并释放出第二个产物。由双倒数图中计算出米氏常数（米氏常数反应了酶结合底物的能力）显示 Fe3O4纳米粒子对 H2O2的结合能力小于天然辣根过氧化物酶，而结合TMB 的能力则大于天然辣根过氧化物酶。和天然辣根过氧化物酶相比，Fe3O4纳米粒子在不同 pH 和温度放置下具有更高的稳定性。 第 2 章 实验材料和方法 2.1 实验方法 称量 0.270 mg 的 FeCl3 6H2O（1 mmol）和 0.152 mg 的硫脲（1 mmol），溶解至 5 mL水和 15 mL乙二醇的混合溶液中。装入 50 mL的反应釜中，180 deg;C反应 12 h。室温下冷却反应釜。离心得到反应物，用水洗涤三次，再用乙醇洗涤一次。60 deg;C 真空干燥 4 h。首先合成硬脂酸锰：称量 1.944 g 硬脂酸钠，溶于 60 mL 水中。加热至90 ℃，溶解并回流 20 min。再加入 0.780 g Mn(CH3COO)bull;4H2O，反应一段时间后，离心得到的白色沉淀，并用热水洗涤。再合成 Mn3O4: 称量 0.03 g硬脂酸锰，加入 0.031 mL 十二胺和 5 mL 甲苯，加热到 70 ℃，形成棕