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关于人参多糖的作用与使用方法 2011级动物科学（1）班 邱碧琼 2011084541 摘要：佐剂(Adjuvant)是指先于抗原注入或与抗原物质混合后同时注入动物机体，能非特异性改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答的一类物质。随着生物技术的发展，新一代疫苗，如合成肽疫苗、基因工程疫苗等的研究已取得了初步成果，但现代疫苗研究过程所遇到的一个关键问题是其免疫原性较弱，往往需要佐剂来克服。因此，近年来免疫佐剂的研究进展更为迅速。在流感灭活疫苗中添加佐剂可以提高疫苗的免疫原性，节约抗原用量。一些天然中草药多糖具有潜在的佐剂效应。本文以人参多糖（GPS）在新甲型H1N1流感病毒裂解型灭活疫苗中的佐剂效应为例探讨它的作用和使用方法。 关键字：人参多糖；免疫；佐剂；中草药 1 引言 中草药是我国的国宝，中草药内含有大量的水溶性多糖和寡糖。人参作为一种传统珍贵中药，临床使用历史已相当悠久。它的主要成分有人参皂苷、人参多糖、人参多肽及挥发油、多种氨基酸、脂肪酸、维生素和微量元素等。而GPS是从人参根、茎、叶等部位提取出来的多糖成分。 2 人参多糖对新甲型H1N1流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用（例子） 2.1 材料和方法 2.1.1 SPF级BALB／c雌性小鼠购自湖北省预防医学科学院动物中心，饲养于SPF级动物房，动物实验在P2+实验室内进行。 2．1.2 疫苗和佐剂 新甲型HlN1流感病毒裂解疫苗由上海生物制品研究所生产。 GPS为人参茎叶多糖(纯度：90％ UV)，购自吉林宏久生物科技股份有限公司(编号：HJ100103一D)，PBS缓冲液溶解，0．22 m过滤器过滤后备用。 A1(OH) 佐剂购自中国疫苗和血清研究所，添加入疫苗使其终浓度为0．5 me-／mL，并于4℃ 震荡1 h后使用。 2.2 免疫方法 以6-8周龄的BALB／c雌性小鼠为实验对象，将疫苗和佐剂按剂量用PBS(-)稀释成200 txL体积，通过腹腔注射的方法免疫一次。其中疫苗的含量均为5 rig(以HA含量计算)。所设组别如下：GPS 200 p,g组、GPS 400 g组、GPS 600g组、GPS 800 g组、GPS 1 200 Ixg组、GPS 1 400 g组、GPS 1 600 g组、GPS 2 000／xg组以及铝佐剂100／zg组；另没有疫苗单独免疫组和不作任何处理的空白对照组。 2.3 样本采集 在免疫后的不同时间点采集小鼠尾静脉血样，于4℃ 冰箱中静置4-5 h，待血清析出后离心分装血清，并保存于一20℃ 冰箱中。 2.4 抗体检测 取小鼠血清样本通过ELISA方法检测lgM、IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度。步骤简述如下：(1)用浓度为10 p~g／mL的灭活疫苗包被96孔酶标板，37℃恒温箱中放置2 h；(2)吸去包被液，用200 mL PBS—T洗三次，加入封闭液于4℃ 冰箱封闭过夜；(3)移去封闭液，将用封闭液梯度稀释的血清分别加入酶标板，37℃恒温箱中温育2 h；(4)移去血清，用PBS·T洗三次，加入用生物素标记的山羊抗鼠二抗，37℃恒温箱温育1 h；(5)移去二抗，用PBS-T洗三次，然后加入碱性磷酸酶标记的链菌蛋白，37℃恒温箱温育1 h；(6)移去链菌蛋白酶，PBS-T洗三次，再加入对磷酸硝基苯酚，37℃ 恒温箱中25 rain显色，通过酶标仪用双波长(450 nm和405 nm)测出OD值，最终计算并确定所测抗体的最高稀释度。 2.5 统计分析 用Student’s ．test对实验组间的数据进行评定，P0．05定为存在显著差异。 2.6 结果表明 添加了GPS的疫苗组IgM抗体相比单独疫苗组有一定的提高，但没有显著性差异。 添加GPS疫苗均能在小鼠体内较长时间地维持高水平的IgG抗体。将GPS与目前在临床上广泛使用的A1(OH) 佐剂进行比较，其中GPS 800ug+灭活疫苗组在第三周和四周时产生的IgG抗体滴度与A1(OH) 佐剂+灭活疫苗组相当。从佐剂的量效关系来看，GPS 800ugg的效果相对来说是最好的。 试验中，使用新甲型H1N1流感病毒裂解疫苗单独免疫，IgG1抗体水平高于IgG2a，表明裂解疫苗单独免疫诱导的免疫反应偏向Th2型；加入GPS或铝佐剂，都没有改变免疫反应类型，但IgG1和IgG2a抗体滴度均显著提高（除了GPS 200ug组）。 3 讨论 以上研究案例中，将GPS作为佐剂与甲型H1Nl流感病毒灭活疫苗共同免疫6- 8周龄的BALB／c小鼠。通过检测小鼠血清中的各类疫苗特异性抗体滴度评价GPS的佐剂效应。表明，GPS可以作为甲型H1 N1流感病毒灭活疫苗的一种有效佐剂。GPS作为一种中药多糖有着独特的优势，纯天然，安全无毒，且有很多其它生物活性，有希望成为新一代的疫苗佐剂。 4 其它作用