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叶绿体色素提取、理化性质鉴定及分光光度法测定其含量 实验原理 实验材料和用品 实验方法和内容 思考题 实验原理 叶绿体是绿色植物进行光合作用的细胞器。叶绿体色素是植物细胞吸收光能，进行光合作用的重要物质。 这些色素可以用有机溶剂提取。 主要含有叶绿素(叶绿素a、叶绿素b)，类胡萝卜素(β-胡萝卜素、叶黄素)。这些色素具有不同的结构、组成、理化性质。 实验原理 叶绿素在一定的溶剂中具有一定的吸收光谱，其吸收高峰的波长是恒定的。叶绿素a和叶绿素b的吸收高峰的波长不同，因此，可以在混合液中根据吸收高峰波长不同而检测出叶绿素a、叶绿素，省去了繁琐的分离手续。 实验方法和内容 2、叶绿体色素的理化性质 A:叶绿素的荧光现象 取4ml上述色素提取液于试管中，在直射光下，分别对着光源、背着光源观察色素提取液的颜色。 B:光对叶绿素的破坏作用 取4ml上述色素提取液于试管中，在直射光下照射1.5小时，观察色素颜色有何变化？ 2、叶绿体色素的理化性质 C:皂化作用 在观察过荧光现象的色素提取液中加入1ml 20%KOH-甲醇溶液，充分摇匀，静置片刻，再加入5ml苯,混匀，然后用滴管沿着管壁缓缓加入1ml蒸馏水。静置片刻，溶液慢慢分为三层：上层为苯，其中的色素为类胡萝卜素和叶黄素；下层为乙醇溶液，其中的色素为已经皂化的叶绿素a、b素和少量叶黄素；试管底部同时出现白色沉淀。另取4ml色素提取液做对照，其他步骤都一样，只是不加KOH-甲醇溶液。 2、叶绿体色素的理化性质 D:氢和铜对叶绿素中镁的替代作用 取4ml色素提取液于试管中,加入数滴5%盐酸，慢慢摇动，可见逐渐由绿色变为褐色。叶绿素中的镁被盐酸中的氢替代，变成了去镁叶绿素。 取一半上述变成了去镁叶绿素溶液，加入少许醋酸铜结晶，缓慢加热，这时，去镁叶绿素中的氢又被铜取代。铜代叶绿素为何种颜色？ 实验方法和内容 3、分光光度法测定色素含量 思考题： 1、荧光现象是叶绿体色素的光化学性质之一，但为什么荧光现象的产生只在色素提取液中可以看见，而在植物绿色叶片中很难看到荧光产生？ 2、通常在提取叶绿体色素时都使用含有一定比例水分的有机溶剂（95%乙醇或80%丙酮），为什么不能使用无水乙醇或丙酮？ * * 实验材料与用品 1、新鲜材料：菠菜叶子(5g/组) 2、实验用品： 天平（5-6台/班）、研钵（1个/组）、剪刀（ 1把/组）、漏斗（1个/组） 、滤纸（9mm，2-3张/组）、试剂瓶（棕色，1个/组）、刻度试管(10ml， 4支/组)、试管架（1个/组） 、试管夹（木制， 1个/组 ）、玻棒（1个/组） 、烧杯(100ml， 1个/组) 、酒精灯（1个/组） 3、试剂： 石英砂 醋酸铜结晶 （此两种药品放在讲台上公用） 95%乙醇（32ml/组） 20%KOH-甲醇溶液（2ml/组） 5%盐酸（1ml/组） 苯（12ml/组） 蒸馏水（10ml/组） 1、色素提取 取5g菠菜叶子（洗净，剪碎） 加入少许石英砂 加入15ml95%乙醇 研磨、匀浆 色素粗提液(棕色试剂瓶保存) 过滤 加入15ml 95%乙醇 研磨、匀浆 过滤 合并 实验方法和内容 实验方法和内容 实验方法和内容 3、色素提取 取1g菠菜叶子（洗净，剪碎） 加入少许石英砂 加入10ml95%乙醇 研磨、匀浆 色素粗提液(定溶至100ml,棕色试剂瓶保存)