紫茎泽兰(Ageratina adenovhora)其优势叶内生真菌的遗传多样性研究.docVIP

　　紫茎泽兰(Ageratina adenovhora)其优势叶内生真菌的遗传多样性研究 第一章前言 1.研究背景 紫墓译生(Ageratina原产自中美洲墨西哥与哥斯达黎加，在热带，亚热带，暖温带和温带的海拔165-2915in的地区均能生长(赵国晶，1989)。19世纪被引入欧洲作为观赏植物后，又被引入澳大利亚和亚洲(Gui，2008)，并扩散至美国、新西兰、南非、西班牙、印度、菲律宾、马来西亚、新加坡、印度尼西亚、巴布亚、新几内亚、泰国、緬甸、越南、中国、尼泊尔、巴基斯坦、太平洋群岛及印度的次喜玛拉雅地区，现广泛分布于全球热带和亚热带30多个国家和地区(万方浩等)，己经对新西兰、澳大利亚、中国和南非等多个国寒捧成了严重的危害(桂富荣，2012)。20世纪40年代，紫室泽兰由緬甸中越边境进入中国云南南部后迅速蔓延，现已在湖北、西藏、重庆、广西、四川、云南、贵州与台湾等地都有分布(石胜瑋，2004)，对当地的农、林、畜牧业生产造成了严重的经济损失，破坏当地生态环境，造成绿色灾难(万方浩,2011)。在我国外来物种中，紫莲泽兰是危害最为严重的植物之一(郝立勤，2001),被列入外来有害生物的防治和国际生防公约中四大恶性杂草之一(夏忠敏，2002),并且，紫莲泽差名列国家环保局2003年公布的首批入侵外来物种名单中的第1位(徐林波，2006)C紫茎泽兰具有极宽的生态适应幅度，可以在热带甚至温带的宽气候带下发生和生长，分布在热带和亚热带地区最多。从气候生境上看，紫莲泽兰分布地年均温度多在12.5-19.3deg;C，年降水量776-1800mm，无霜期200-300d,但在年平均相对湿度高于68%，绝对最低温度不低于-11.5 最高气温小于35deg;C的气候条件下也能生长。紫莲泽兰萌芽的pH值在4.0-7.0之间，过酸过碱不能萌发，并且种萠发的土壤湿度要高于30%，60%左右为最适湿度，15-20deg;C为发芽的最适温度，当土壤含水量低于16%时，植物体不能生存(梁小玉，2004)。 . 1.2积累病原微生物假说 在某一植物根部共生的土壤微生物群落，也可能会影响其它植物种群的生长，从而改变植物种群间的竞争(Van derPutten, 1997)。在一个相似的进化背景下，对于许多外来物种的入侵，土壤病原菌发挥着重要的作用(Reinhart，2006)。这些入侵植物与土壤微生物的反馈作用对许多本地植物种群具有负面影响，进而提升入侵植物的种间竞争力(Bever，1994; Klironomos, 2002; Peterraann, 2008; Van derPutten, 1993)。当外来植物入侵到一个新的环境中，土壤微生物群落可以影响入侵植物种群的建立，并且有助于其入侵(Bever，2003; Haos(2002)的研宄发现，入侵地土壤中的病原菌显著降低本地植物的生物量，而对入侵种则无影响，在对土壤进行灭菌处理后这种抑制作用则不复存在，说明这种本地植物生物量降I低的现象是由土壤生物所引起的。 第二章紫基泽兰叶内生优势炭疽菌与本地植物叶病原菌研究 1材料与方法 使用GPRS定位系统对各居群韩度，经度，海拔进行记录。参照文献(eietal.,2014)，估算的紫莲泽兰的入侵时间，来确定本次研宄紫莲泽兰不同居群的入侵时间，各样地信息详见表2-1。使用常规内生菌分离法MEA法(Arnold，2003)?将健康的紫莲泽兰叶片中间部分（避开叶脉）剪成2nim2的小片，用慑子将小片浸于0.5% NaClO溶液中消毒2min，含20M?g/ml青霉素和40g/ml链霉素，抑制细菌生长），室温培养观察（待回到实验室后作下一步处理），无其它菌落生长则表明表面消毒彻底(宋素琴等，2007)。每种病斑叶片每皿放置6个小片段，重复3皿，带回实验室后，挑取可能的炭疽菌株三点点植于新的双抗PDA平板上，28-C培养3天后，将纯化的菌株接至PDA斜面，4deg;C保存备用。 2结果 共分离出883株菌，其中紫蓬泽兰和本地植物叶病原真菌431株，紫莲泽兰叶内生真菌452株，成功测序826株菌。校对序列的可靠性，并将序列与NCBI比对后，可供分析菌株753株。各样地分离到的真菌数量、紫客泽兰叶内生真菌的数量、本地植物病原菌数量、划分的单倍型个数具体信息见表2-2。各单倍型包含的菌株数量以及这些菌株在各居群中的分布、宿主情况详见附表1，与GenBank比对得到的序列号详见附表2。成功测序的826株真菌经序列分析与NCBI比对后，初步鉴定炭疽菌为562株。562株炭疽菌共分成59个基因型，这些菌株在各居群的宿主分布及基因型信息详见表2-3。在这59个haplotypes中按菌株数量划分可有有两个优势单倍型，单倍型177包括142株炭疽菌，单倍型158包括112株炭